アデノウイルスを用いた血管壁に対するナトリウム利尿ペプチド系遺伝子導入

使用腺病毒将利钠肽基因转移至血管壁

基本信息

批准号：
08671361
负责人：
池田義
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

C型ナトリウム利尿ペプチド(CNP)発現非増殖性アデノウイルスを作製し、血管平滑筋細胞に対する増殖抑制効果をβ-ガラクトシダーゼ発現ウイルスを感染させた対照群と比較した。CNP発現ウイルスを感染させた培養血管平滑筋細胞におけるCNP産生は培養血管内皮細胞の約4000倍であったのに対し、対照群ではCNP産生は認められなかった。これに伴ってCNP発現ウイルス感染群ではcyclic GMP産生も著明に増加し、対照群に比し34%の増殖抑制効果が認められた。次に子牛血清にて増殖を刺激した培養血管平滑筋細胞にこれらのウイルスを感染さ、flow cytometryによる検討を行った。対照群では35%の細胞が細胞周期のG2/M+S期にあったのに対し、CNP発現ウイルス感染群では14%の細胞がG2/M+S期であり、過剰発現したCNPは血管平滑筋細胞の増殖を細胞周期のG1期で停止させることが示唆された。これらの細胞におけるcyclinの遺伝子発現をRT-PCR法で検討すると、CNP発現ウイルス感染群では対照群に比し、cyclin Aの発現が遅れて認められ、これがCNPによる細胞周期制御の機序の一つであることが示唆された。次にin vivoにおいて、バルーン傷害後のウサギ大腿動脈にこれらのウイルスを感染させ、2週間後の血管の組織像を見ると、対照群では内膜中膜面積比が0.81であったのに対し、CNP感染群では0.38%と53%の新生内膜増殖抑制効果が認められた。このことから増殖性血管病変に対し、血管壁局所におけるCNPの過剰発現はin vivoにおいても血管平滑筋細胞増殖抑制に働くことが明らかになった。以上のことからCNPはオートクリン、パラクリン因子として将来的に増殖性血管病変に対する遺伝子治療の手段として利用可能であると考えられた。

产生了C-钠手术肽（CNP）预期的非增殖性腺病毒，并与感染了β-半乳糖苷酶表达病毒的对比组与血管平滑肌细胞增殖的作用。感染CNP表达病毒的培养的血管平滑肌细胞中的CNP产生约为培养的血管内皮细胞的4000倍，而对照组不允许CNP产生。基于此，CNP病毒感染组的环状GMP产生显着增加，与对照组相比，观察到34％的增殖抑制作用。接下来，这些病毒被刺激血管血管增殖的培养的血管平滑肌细胞感染，并检查了流式细胞术。在对比组中，35％的细胞在细胞周期G2/m+s周期中，而CNP表达病毒感染组14％的细胞为G2/m+S期，过多的CNP是血管有人建议在细胞周期的G1阶段停止平滑肌细胞的生长。考虑到这些细胞中细胞周期蛋白基因表达的RT-PCR方法，在CNP表达病毒感染组中，细胞周期蛋白A的表达延迟，这是CNP细胞周期控制的机制之一。接下来，在体内，这些病毒在球囊损伤后被感染在股股动脉中，两周后看到血管的图像时，CNP感染组的内部膜比为0.81。抑制为0.38％的新子宫内膜增殖，识别出53％。这表明血管壁中血管壁中CNP表达过度表达，也作用于体内，以抑制血管平滑肌细胞的生长。从上面，CNP被认为是将来作为自动临床和帕拉克林因子的增殖血管的基因治疗方法。