腫瘍血管新生機構の解明-低酸素誘発性VEGF産生亢進の分子機構を中心に-

阐明肿瘤血管生成机制 - 聚焦缺氧诱导VEGF产生增强的分子机制 -

• 批准号: 08670262
• 负责人: 池田 栄二
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670262/
• 关键词: 血管新生; VEGF; 低酸素; HIF-1; AP1; 腫瘍

腫瘍血管新生の分子機構解明のため、そのkey stepである低酸素誘発性VEGF産生亢進機序の解析を引き続き行った。解析には、C6 glioma cellを用い我々が確立したin vitro低酸素実験系を用いた。これまでに我々は、human VEGF geneの5′-flanking regionにVEGF geneの低酸素誘発性転写亢進を担う293bpのhypoxia-responsive element(以下、HRE)を同定した。今年度は、このHREに付き、さらに詳細な検索を加えた。まず、HRE(293bp)の配列の解析を行ったところ、HRE中に、erythropoietin(EPO)geneの低酸素誘発性転写亢進制御因子として同定されたhypoxia-inducible factor 1(HIF-1)の結合配列が認められた。そこで我々は、human VEGFの5′-flanking regionを含む低酸素反応性のreporter constructからHIF-1結合配列を削除(deletion)し低酸素反応性の変化を検索した。その結果、HIF-1結合配列を削除されるとreporter constructの低酸素反応性は消失するとが示された。即ち、HIF-1結合配列がEPO geneと同様にVEGF geneの低酸素誘発性転写亢進にも必須の配列であることが示された。また、興味深い知見として、HIF-1結合配列を残しHREの5′側150bpを削除したところ、reporter constructの低酸素反応性は残るが、その反応の程度は低下した。つまり、HREの5′側150bp内にHIF-1結合配列による低酸素反応性をpotentiateする働きをもつ配列が存在することが示唆された。我々は、種々のdeletion constructの作製、electromobility shift assay (EMSA)およびsupershift assayによる検索を通じ、上記のpotentiating sequenceがAP1結合配列であることを明らかにした。以上のとおり、今年度の研究成果は、低酸素誘発性VEGF産生亢進機序の分子機構について新たな知見を与える有意義なものと考えられる。

为了阐明肿瘤血管生成的分子机制，我们继续分析其中的关键步骤，即缺氧诱导VEGF产生增强的机制。为了进行分析，我们使用了利用 C6 神经胶质瘤细胞建立的体外缺氧实验系统。迄今为止，我们在人VEGF基因的5'侧翼区域鉴定了一个293bp的缺氧反应元件（HRE），它负责缺氧诱导的VEGF基因转录增强。今年，我们对此神罗添加了更详细的搜索。首先，我们分析了HRE（293bp）的序列，发现它含有缺氧诱导因子1（HIF-1）的结合序列，HIF-1被鉴定为缺氧诱导的促红细胞生成素（EPO）基因的转录增强调节因子。被认可了。因此，我们从含有人 VEGF 5' 侧翼区域的缺氧反应报告构建体中删除了 HIF-1 结合序列，并寻找缺氧反应性的变化。结果表明，当HIF-1结合序列被删除时，报告构建体的缺氧反应性消失。换句话说，HIF-1结合序列被证明是缺氧诱导VEGF基因转录增强的必需序列，类似于EPO基因。一个有趣的发现是，当HRE 5'端的150 bp被删除，留下HIF-1结合序列时，报告构建体的缺氧反应性仍然存在，但反应程度降低了。换句话说，表明HRE 5'侧150bp内存在一个序列，其具有由于HIF-1结合序列而增强缺氧反应性的功能。通过创建各种缺失构建体并使用电动迁移率位移测定（EMSA）和超级位移测定进行搜索，我们发现上述增强序列是 AP1 结合序列。如上所述，今年的研究结果被认为对于提供有关缺氧诱导VEGF产生增强的分子机制的新认识具有重要意义。