膠原病合併間質性肺疾患における肺局所リンパ球の免疫制御機構の解明

阐明间质性肺病并发胶原病中局部肺淋巴细胞的免疫调控机制

基本信息

批准号：
22KJ2730
负责人：
中澤真帆
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2730/
关键词：
特発性炎症性筋疾患

项目摘要

間質性肺疾患は関節リウマチや特発性炎症性筋疾患等、自己免疫性疾患に高率に合併し予後不良な病態にもかかわらず、確立された治療法はなく病態は不明である。申請者は以前、膠原病合併間質性肺疾患における肺局所の免疫細胞の表現型を詳細に解析し報告した。その結果からcoinhibitory分子陽性T細胞は抗原特異的に機能し、抗原特異的B細胞の自己反応性抗体産生に関与している可能性が考えられた。そこで膠原病合併間質性肺疾患において、高い間質性肺疾患合併率が報告されている抗Jo-1抗体陽性特発性炎症性筋疾患合併間質性肺疾患に着目し、自己反応性抗原特異的B細胞の特徴の解明を目的とした。本年度は、まず抗Jo-1抗体特発性炎症性筋疾患患者の末梢血中における抗原特異的B細胞の同定を目指した。抗Jo-1抗体の対応抗原はヒスチジルtRNA合成酵素であることが報告されている。そこで、ビオチン化したヒスチジルtRNA合成酵素を作成し、蛍光標識ストレプトアビジンと反応させることで蛍光標識ヒスチジルtRNA合成酵素4量体を作成した。末梢血から末梢血単核細胞を単離し、B細胞を濃縮した検体を用いて、患者末梢血中のヒスチジルtRNA合成酵素結合B細胞の検出を目指した。しかし作成した4量体に非特異的に結合するB細胞を多数検出した。ヒスチジルtRNA合成酵素は約60kDaと比較的大きい分子であり、非特異的結合B細胞の除去が必要と考えられた。またヒスチジルtRNA合成酵素は3つのドメインをもつことが知られており、そのドメインを用いた4量体の作成、比較検討を予定している。

尽管间质性肺疾病经常与类风湿性关节炎、特发性炎症性肌病等自身免疫性疾病并存，预后较差，但目前尚无确定的治疗方法，发病机制尚不清楚。申请人之前报道了对与胶原病相关的间质性肺病中肺部局部免疫细胞表型的详细分析。结果表明，共抑制分子阳性 T 细胞以抗原特异性方式发挥作用，并可能参与抗原特异性 B 细胞产生自身反应性抗体。因此，我们重点关注据报道间质性肺疾病并发症发生率较高的抗Jo-1抗体阳性特发性炎症性肌病并发间质性肺疾病，旨在阐明胶原病并发间质性肺疾病。特定 B 细胞的特征。今年，我们首先旨在鉴定抗 Jo-1 抗体诱导的特发性炎症性肌病患者外周血中的抗原特异性 B 细胞。据报道，抗Jo-1抗体的相应抗原是组氨酰tRNA合成酶。因此，我们创建了一种生物素化的组氨酰-tRNA 合成酶，并将其与荧光标记的链霉亲和素反应，以创建荧光标记的组氨酰-tRNA 合成酶四聚体。我们的目的是通过从外周血中分离外周血单核细胞并使用富含 B 细胞的样本来检测患者外周血中组氨酰-tRNA 合成酶结合的 B 细胞。然而，我们检测到大量 B 细胞与制备的四聚体非特异性结合。组氨酰-tRNA 合成酶是大约 60 kDa 的相对较大的分子，并且被认为有必要去除非特异性结合的 B 细胞。此外，已知组氨酰-tRNA合成酶具有三个结构域，我们计划使用这些结构域创建四聚体并进行比较研究。