光合成遺伝子発現に異常をきたした変異体の単離

光合基因表达异常突变体的分离

基本信息

批准号：
07858080
负责人：
丹羽康夫
金额：
$ 0.58万
依托单位：
University of Shizuoka
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

研究課題を遂行するために,activationタギング用のベクターとして,カリフラワーモザイクウイルス35SRNAプロモーターのエンハンサーを,選択マーカー遺伝子にスルフォニルウレア耐性のアセトラクテート合成酵素遺伝子を,そしてRiプラスミドの複製起点をもつプラスミドを構築した.このバイナリーベクターを用い,すでに光合成遺伝子の発現を容易に検出するために作製した,光合成遺伝子のプロモーター領域とレポーター遺伝子とのキメラ遺伝子を持つシロイヌナズナに,vacuum infiltration法にてT-DNA領域を導入することを試みた.これまでに,100個体を超える独立した形質転換シロイヌナズナを得ることができた.得られた形質転換体の中から,目的とする変異植物体を,レポーター遺伝子の発現を指標として選抜を行った.その結果,いくつかの候補を得ることができた.今後さらに詳細な検討をする予定である.また,シロイヌナズナの一過性発現系を利用して,酵母の部位特異的組換え反応は,熱ショックタンパク質遺伝子プロモーターと組み合わせることで,温度により制御可能であることを見いだした.そこで,染色体上に組み込まれた状態でも同様な制御が可能かどうかを検討する目的で,バイナリーベクターを構築した.得られたベクターをアグロバクテリアに導入後,形質転換シロイヌナズナを作成した.得られた形質転換体の解析結果から,染色体上に組み込まれた状態でも,目的とする反応が期待どおりおこることが確認された.さらに,この系をより発展させるために,green fluprescent protein(GFP)およびその改変型GFPの高等植物での利用を検討した.その結果,改変型GFPの有用性を示すことに成功した.

为了执行我们的研究主题，我们构建了花椰菜马赛克病毒的增强子35sRNA启动子作为激活标记载体，耐磺酰脲抗氧化二酸酯合酶基因和具有RI质粒复制的起源的质粒。使用该二进制载体，我们在光合基因的启动子区域和记者基因之间创建了一个嵌合基因，并在拟南芥中使用了真空，该基因已经在光合作用基因的启动子区域之间具有嵌合基因和记者基因。我们尝试使用渗透方法引入T-DNA区域。迄今为止，超过100个人能够获得独立转化的拟南芥。从获得的转化体中，使用报告基因的表达作为指数选择目标突变植物。结果，获得了几个候选人。我们计划将来进一步研究。此外，使用拟南芥的瞬时表达系统，可以通过遗传热休克蛋白基因来实现酵母中位点特异性重组反应。已经发现，与儿童促进者结合使用时可以通过温度来控制它。因此，构建了二元载体，以研究即使整合在染色体上时，是否可能进行类似的对照。在将获得的载体引入农杆菌后，创建了转化的拟南芥。对所得转化剂的分析证实，即使整合在染色体上时，也会发生所需的反应。此外，为了进一步开发该系统，使用了绿色。我们研究了毛茸茸的蛋白质（GFP）及其在上等植物中的修饰GFP的使用。结果，我们成功证明了修改后的GFP的实用性。