ウイルスベクターによる遅い軸索輸送の解析

病毒载体缓慢轴突运输的分析

• 批准号: 07857001
• 负责人: 寺田 純雄
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07857001/
• 关键词: 軸索輸送; ウイルスベクター; ニューロフィラメント

研究代表者は平成3年4月より神経細胞の細胞骨格に関する分子細胞生物学的研究,特に軸索輸送に関与するモーター分子の機能解析に従事してきた。この過程で,従来困難とされてきた神経細胞への遺伝子導入が,ウイルスベクターを利用することにより可能となることを見出してきた。そこでエピトープタッギングを行ったニューロフィラメントM遺伝子をアデノウイルスベクターに組み込み,これをニューロフィラメントH+lacZの融合遺伝子が導入されたトランスジェニックマウスのL4の後根神経筋へ注入し,その遺伝子産物の坐骨神経内での動態を電子顕微鏡レベルで解析することを目的として、実験を開始した。まず遺伝子工学的手法によりエピトープタッギングを行ったニューロフィラメントM遺伝子を作製した。次にこの遺伝子を非増殖型組み換えアデノウイルスベクターに組み込んだ。培養細胞での発現チェックを経た上で,これを超遠心分離により高度に濃縮,精製することに成功した。現在、精製の済んだ濃縮ウイルス液を実体顕微鏡下,部分椎弓切除によって露出したトランスジェニックマウスのL4後根神経節へ微量注入する実験を行っている所である。

自1991年4月以来，研究人员一直参与有关神经元细胞骨架的分子细胞生物学研究，特别是对参与轴突转运的运动分子的功能分析。在此过程中，已经发现，可以使用病毒载体使基因转移到过去被认为很难的神经元转移。 Therefore, the epitope-tagged neurofilament M gene was incorporated into an adenoviral vector, and this was injected into the dorsal root neuromuscle of L4 in transgenic mice to which the neurofilament H+lacZ fusion gene was introduced, and the experiment was started with the aim of analyzing the dynamics of the gene product within the sciatic nerve at the electron microscope level.首先，使用基因工程方法通过表位标记产生神经丝M基因。然后将该基因纳入非增殖的重组腺病毒载体中。在培养细胞中进行表达检查后，它被成功地浓缩并通过超速离心进行纯化。当前，我们正在进行一个实验，其中将纯化的浓缩病毒溶液注入了在立体显微镜下通过部分椎板切除术暴露于部分层状小鼠的背基L4根神经节中。