虚血性神経細胞死における遺伝子発現の変化

缺血性神经细胞死亡过程中基因表达的变化

基本信息

批准号：
07771083
负责人：
斉藤延人
金额：
$ 0.7万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771083/
关键词：
脳虚血神経細胞死サイクリン

项目摘要

齧歯類における短時間の脳虚血後の海馬CA1領域の遅発性神経細胞死のモデルでは神経細胞死の組織像は典型的なネクローシスとは異なっており、その細胞死の課程において神経系のprogrammed cell deathと共通の経路をたどる可能性が考えられる。神経系のprogrammed cell deathのモデルでは、cell cycle関連遺伝子であるcyclin D1の発現が増加し、cell cycle関連遺伝子のバランスが変化することが細胞死と関連あるという報告がある。遅発性神経細胞死の際にもこれらのバランスの変化が神経際死に関与しているのかを調べるために、砂ネズミの5分間両側頚動脈閉塞モデルを用いてcell cycle関連遺伝子であるcyclin D1, cyclin D2, cyclin D3,及び、cdk4, cdk5の発現の変化をノーザンブロッティングで解析した。麻酔下に砂ネズミの両側内頚動脈を5分間閉塞、再開通し、一過性脳虚血をモデルを作成した。虚血後、1.5時間、3時間、6時間、12時間、24時間後にネズミをsacrificeし、脳を取り出し海馬を摘出して、mRNAを抽出した。cyclin D1、cyclin D2、cyclin D3、及び、cdk4、cdk5の各プローブは合成ologonucleotide primerを用いてRT-PCRで作成し、DNAシークエンスを読んで確認した。10ug/laneのtotal mRNAを電気泳動し、cell cycle関連遺伝子のprobeを用いてノーザンブロッティングを行った。虚血後24時間後までにはcell cycle関連遺伝子であるcyclin D1、cyclin D2、cyclin D3、及び、cdk4、cdk5のmRNA発現に有意な変化は認められないことがわかった。cell cycle関連遺伝子の発現の変化は頸部交感神経節のprimary cultureを用いた神経系のprogrammed cell deathのモデルに特異的な現象なのかもしれない。それ以外のアポトーシス関連遺伝子の発現の変化が遅発性神経細胞死に関係している可能性があるので、今後さらにそこれらの遺伝子の発現の変化も調べる予定である。

在啮齿动物短脑缺血后，海马CA1地区晚期神经元细胞死亡的模型中，神经元细胞死亡的组织学与典型的坏死不同，并且可能沿着细胞死亡过程中神经系统的程序性细胞死亡的常见途径遵循常见的途径。在神经系统中编程细胞死亡的模型中，有报道称与细胞周期相关基因Cyclin D1的表达增加，并且与细胞周期相关基因的平衡改变与细胞死亡有关。为了研究这些平衡的变化是否参与神经元细胞后期的神经死亡，我们使用5分钟的双侧颈动脉闭塞模型分析了与细胞周期相关基因，细胞周期蛋白D1，Cyclin D2，Cyclin d2和CDK4和CDK5的变化。在麻醉下，将砂小鼠的双侧内部颈动脉闭塞5分钟，然后重新开放以建模瞬时缺血。缺血后，小鼠被牺牲1.5、3、6、12和24小时，然后牺牲小鼠，去除大脑，提取海马，并提取mRNA。 Cyclin D1，Cyclin D2，Cyclin D3和CDK4和CDK5探针是通过RT-PCR使用合成寡核苷酸引物创建的，并读取并确认了DNA序列。将10ug/泳道总mRNA电泳，并使用与细胞周期相关的基因探针进行北印迹。发现在缺血后24小时，在细胞周期相关基因，细胞周期蛋白D1，Cyclin D2，Cyclin D3和CDK4和CDK5的mRNA表达中未观察到显着变化。使用宫颈交感神经节的原发性培养物，与细胞周期相关基因表达的表达变化可能是神经系统中编程细胞死亡模型的一种现象。由于其他与凋亡相关的基因表达的变化可能与神经元细胞死亡缓慢有关，因此这些基因表达的变化也将在未来研究。