遅発性神経細胞死における細胞骨格蛋白質の変性に関する研究

神经元细胞延迟死亡中细胞骨架蛋白变性的研究

基本信息

批准号：
08771055
负责人：
斉藤延人
金额：
$ 0.7万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771055/
关键词：
脳虚血神経細胞死アポトーシス細胞骨格蛋白質

项目摘要

海馬CA1領域の遅発性神経細胞死のモデルでは、神経細胞死の組織像は典型的なネクローシスとは異なっており、その細胞死の過程でアポトーシスと共通の経路をたどる可能性が考えられている。海馬CA1領域のアポトーシス様神経細胞死と細胞骨格の破壊の関係について、細胞骨格蛋白質のimmunoblottingと、H-E染色による形態の観察、アポトーシスを検出するTUNEL染色、細胞骨格蛋白質の免疫染色を比較し、調べた。ハロセン麻酔下、砂ネズミの5分間両側総頚動脈結紮による一過性脳虚血を作成した。このモデルでは約4日間かけて神経細胞死が進行する。虚血後8時間、1日、2日にスナネズミ脳から海馬を取り出し定量した後に、immunoblottingで細胞骨格蛋白質の破壊を調べた。lamin、α-actinin、α-tubulin、MAP2、kinesin、dyneinのimmunoblottingではこれらの細胞骨格蛋白質の破壊は見られなかった。spectrinの分解産物は、分解産物の特異抗体で検出できた。虚血後比較的早期には細胞骨格蛋白質の部分的破壊のみ起こっているものと思われた。また、虚血後、24、48、72時間の再潅流時間後にスナネズミ脳を4%パラフォルムアルデヒドで潅流固定し、パラフィン切片を作った。隣り合わせの切片でH-E染色、TUNEL染色、細胞骨格蛋白質MAP2、チュブリンの免疫染色を行った。TUNEL染色でアポトーシスを示唆する細胞群の形態は、H-E染色では細胞の縮小した虚血性変化を示していた。また、この付近の細胞群では細胞骨格蛋白質は染色できなくなっていた。遅発性神経細胞死におけるアポトーシス様神経細胞死と細胞骨格蛋白質の破壊に密接な関係があると思われた。

在海马CA1区域神经元死亡的模型中，神经元死亡的组织学不同于典型的坏死，并且人们认为细胞死亡过程可能遵循凋亡的常见途径。比较了海马CA1区域中凋亡样神经元死亡与细胞骨架破坏之间的关系，并通过对细胞骨架蛋白的免疫印迹进行了检查，并检查了H-E染色，H-E染色，TUNEL染色，TUNEL染色，检测细胞凋亡以及检测cytoskeletal蛋白质的免疫染色。瞬态缺血是通过双侧共同的颈动脉连接在卤素麻醉下持续5分钟而产生的。在此模型中，神经元细胞死亡大约四天。缺血后1和2天从沙鼠大脑中去除海马后，进行定量，并使用免疫印迹检查了细胞骨架蛋白的破坏。在层粘连蛋白，α-肌动蛋白，α-微管蛋白，MAP2，驱动蛋白和动力蛋白的免疫印迹中未观察到这些细胞骨架蛋白的破坏。使用降解产物的特异性抗体检测到谱的降解产物。似乎只有部分破坏细胞骨架蛋白是缺血后相对较早发生的。此外，在缺血之后，在再灌注时间为24、48和72小时后，将沙鼠大脑灌注4％多聚甲醛，并进行了石蜡切片。对侧面切片进行H-E染色，TUNEL染色，细胞骨架蛋白MAP2和微管蛋白的免疫染色。细胞群的形态表明在TUNEL染色上凋亡显示出H-E染色细胞的缺血性变化降低。此外，细胞骨架蛋白不再能够在该区域周围的细胞组中染色。看来，在晚发神经元死亡中，凋亡样神经元死亡与细胞骨架蛋白的破坏之间存在密切的关系。