遅発性神経細胞死における細胞骨格蛋白質の変性に関する研究

神经元细胞延迟死亡中细胞骨架蛋白变性的研究

基本信息

批准号：
08771055
负责人：
斉藤延人
金额：
$ 0.7万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771055/
关键词：
脳虚血神経細胞死アポトーシス細胞骨格蛋白質

项目摘要

海馬CA1領域の遅発性神経細胞死のモデルでは、神経細胞死の組織像は典型的なネクローシスとは異なっており、その細胞死の過程でアポトーシスと共通の経路をたどる可能性が考えられている。海馬CA1領域のアポトーシス様神経細胞死と細胞骨格の破壊の関係について、細胞骨格蛋白質のimmunoblottingと、H-E染色による形態の観察、アポトーシスを検出するTUNEL染色、細胞骨格蛋白質の免疫染色を比較し、調べた。ハロセン麻酔下、砂ネズミの5分間両側総頚動脈結紮による一過性脳虚血を作成した。このモデルでは約4日間かけて神経細胞死が進行する。虚血後8時間、1日、2日にスナネズミ脳から海馬を取り出し定量した後に、immunoblottingで細胞骨格蛋白質の破壊を調べた。lamin、α-actinin、α-tubulin、MAP2、kinesin、dyneinのimmunoblottingではこれらの細胞骨格蛋白質の破壊は見られなかった。spectrinの分解産物は、分解産物の特異抗体で検出できた。虚血後比較的早期には細胞骨格蛋白質の部分的破壊のみ起こっているものと思われた。また、虚血後、24、48、72時間の再潅流時間後にスナネズミ脳を4%パラフォルムアルデヒドで潅流固定し、パラフィン切片を作った。隣り合わせの切片でH-E染色、TUNEL染色、細胞骨格蛋白質MAP2、チュブリンの免疫染色を行った。TUNEL染色でアポトーシスを示唆する細胞群の形態は、H-E染色では細胞の縮小した虚血性変化を示していた。また、この付近の細胞群では細胞骨格蛋白質は染色できなくなっていた。遅発性神経細胞死におけるアポトーシス様神経細胞死と細胞骨格蛋白質の破壊に密接な関係があると思われた。

在海马CA1区延迟性神经元细胞死亡的模型中，神经元死亡的组织学与典型的坏死不同，表明细胞死亡过程可能遵循与细胞凋亡相同的途径。我们通过比较细胞骨架蛋白的免疫印迹、通过 H-E 染色观察形态、检测细胞凋亡的 TUNEL 染色以及细胞骨架蛋白的免疫染色，研究了海马 CA1 区细胞凋亡样神经元死亡和细胞骨架破坏之间的关系。在氟烷麻醉下，通过双侧颈总动脉结扎5分钟，诱导沙鼠短暂性脑缺血。在该模型中，神经元细胞死亡大约持续四天。缺血后8小时、1天和2天从沙鼠大脑中取出海马并进行定量，然后通过免疫印迹检查细胞骨架蛋白的破坏。核纤层蛋白、α-肌动蛋白、α-微管蛋白、MAP2、驱动蛋白和动力蛋白的免疫印迹未显示这些细胞骨架蛋白受到任何破坏。可以使用针对降解产物的特异性抗体来检测血影蛋白的降解产物。似乎在缺血后相对较早的时期仅发生了细胞骨架蛋白的部分破坏。此外，沙鼠脑在缺血后再灌注24、48和72小时后用4%多聚甲醛灌注固定，并制作石蜡切片。对相邻切片进行 H-E 染色、TUNEL 染色以及细胞骨架蛋白 MAP2 和微管蛋白的免疫染色。 TUNEL染色显示细胞群形态发生凋亡，H-E染色显示细胞缺血性改变减少。此外，该区域附近的细胞群中的细胞骨架蛋白不再被染色。细胞凋亡样神经细胞死亡与延迟性神经细胞死亡中细胞骨架蛋白的破坏之间似乎存在密切关系。