巨核球分化にともなう転写因子NF-E2のダウンレギュレーションのしくみ

巨核细胞分化过程中转录因子NF-E2下调的机制

基本信息

批准号：
06770536
负责人：
土岐力
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Hirosaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770536/
关键词：
巨核球組織特異的転写因子 NF-E2

项目摘要

【研究背景】多能性幹細胞が赤芽球系前駆細胞へ分化決定する過程において、組織特異的転写因子NF-E2が、重要な機能を果たしている。しかし、この因子は赤芽球系および巨核球系の細胞に発現が認められている。また、様々な実験結果から、赤芽球系および巨核球系の細胞は共通の前駆細胞から派生していることが示唆されている。しかし、各々の細胞系へ分化するメカニズムについては不明である。【研究目的および計画・方法】本研究の目的は:ヒトNF-E2の巨核球分化にともなうダウンレギュレーションのしくみ)明らかにし、巨核球分化の決定機構に関する知見を得ることにある。具体的には、第一に、NF-E2のダウンレギュレーションがタンパク質レベルにおいても起こっているかどうかを明らかにする。第二に、巨核球系細胞株に強制的にNF-E2を発現させた場合、分化誘導が阻止されるかどうかをみる。第三に、ヒトNF-E2の遺伝子をクローニングし、ダウンレギュレーションのしくみを分子生物学的に明らかにする。【これまでの研究成果】【1.巨核球分化にともなうNF-E2のダウンレギュレーションをRNAおよびタンパク質レベルで検索する】遺伝子組み換え型NF-E2タンパクを作成し、これに対するモノクローナル抗体を作成した。これを用いて、免疫染色によりNF-E2タンパクを検出するのに成功した。また、ノーザンブロット法にて、7種類中6種類の巨核球系のcell lineにおいてNF-E2のダウンレギュレーションが起きていることを確認した。【2.NF-E2の強制的な発現は巨核球分化を阻止しうるか?】哺乳動物細胞用発現ベクターを作成した。【3.ヒトp45 NF-E2遺伝子の単離と発現調節機構の解明】1995年2月に、ヒトp45 NF-E2遺伝子の単離に成功した。現在、塩基配列を決定しプロモーター・エンハンサー領域の検索を進めている。

【研究背景】组织特异性转录因子NF-E2在决定多能干细胞向红系祖细胞分化的过程中发挥着重要作用。然而，已发现该因子在红细胞和巨核细胞中表达。此外，各种实验结果表明，成红细胞和巨核细胞源自共同的祖细胞。然而，分化成每个细胞谱系的机制尚不清楚。【研究目的、计划和方法】本研究的目的是阐明人巨核细胞分化过程中NF-E2的下调机制，了解巨核细胞分化的决定机制。具体来说，首先，我们将澄清NF-E2的下调是否也发生在蛋白质水平。其次，我们将检查当NF-E2在巨核细胞系中强制表达时，分化诱导是否被阻断。第三，我们将克隆人NF-E2基因并从分子水平阐明下调机制。 [以往的研究成果] [1.在RNA和蛋白质水平上寻找伴随巨核细胞分化的NF-E2的下调]我们创建了重组NF-E2蛋白并创建了针对它的单克隆抗体。利用这一点，我们成功地通过免疫染色检测了 NF-E2 蛋白。此外，通过Northern印迹证实NF-E2在7种巨核细胞系中的6种中下调。 [2. NF-E2的强制表达可以阻止巨核细胞分化吗？] 我们创建了哺乳动物细胞的表达载体。 [3.人p45 NF-E2基因的分离及表达调控机制的阐明] 1995年2月，我们成功分离了人p45 NF-E2基因。我们目前正在确定碱基序列并寻找启动子/增强子区域。