電気泳動で分離した繰り返し配列を直接検出する迅速なMVR-PCR法の法医学的応用

快速 MVR-PCR 方法直接检测电泳分离的重复序列的法医应用

• 批准号: 06770318
• 负责人: 山本 敏充
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770318/
• 关键词: Minisatellite; MVR-PCR; Forensic Specimen; Rapid Detection; Minisatellite; MVR-PCR; Forensic Specimen; Rapid Detection

1991年ジェフリーズらにより開発されたDIS8座位におけるMVR-PCR法は、ヒトミニサテライトの繰り返し単位内の変異をPCR法を用いて検出し、個人をデジタルコード化して識別する画期的な方法で、膨大なアリル内の変異を明らかにするため、法医学領域でも大きな威力を発揮する個人識別法として非常に注目されている。我々はいち早くその方法を法医資料に応用し、微量な血痕、唾液斑等の斑痕試料や1本の抜去毛からでも十分マッピングできることを報告してきた。しかし、MVR-PCR法(通常法)では、増幅したPCR産物を電気泳動後、サザンブロッティングや放射性標識プローブを用いたハイブリダイゼーションなどの煩雑な操作のため、検査時間が長く、特別な施設が必要となるなど、一般的になじみにくい。そこで、我々は増幅DNAをアガロースゲル電気泳動後、直接エチジウム・ブロマイド染色するタイピング法(迅速検出MVR-PCR法:迅速検出法)の開発を試み、この方法が実際の法医資料へ応用可能かどうか検討した。PCRサイクル数を増やすなどして開発した迅速検出法と通常法の結果を血縁関係のない健常日本人40名の血液から抽出したゲノムDNAを用いて比較したところ、通常法では、1つのマッピングから少なくとも60コードを判定できるが、迅速検出法では、平均41コードを判定できた。また、迅速検出法を血痕に応用したところ、3ヵ月経過の6名の血痕から抽出したDNAからも平均して39番目のコードまで正確に読むことができた。本法は通常法に比べ検出されるコード数はやや少ないものの、簡便かつ迅速であり信頼できる方法であることがわかり、法医鑑識実務への応用が期待される。

Jeffries等人开发的DIS8基因座的MVR-PCR方法。在1991年，是一种开创性的方法，在这种方法中，使用PCR方法检测到人类迷你大卫星重复单位中的突变，并用数字编码个体，并且是一种鉴定等位基因内突变的突破性方法，并吸引了极大的关注作为单个识别方法，在法医领域中非常有效。我们是第一个将这种方法应用于法医材料的人，并报告说，即使是少量的血迹，唾液斑点或一条头发也可以充分映射。但是，使用MVR-PCR方法（正常方法），放大的PCR产物是电泳的，然后使用放射性标记的探针进行复杂的操作，例如Southern印迹和杂交，因此很难坚持使用，因为检查时间很长，需要特殊设施。因此，我们尝试开发一种打字方法（快速检测MVR-PCR方法：快速检测方法），在该方法中，在琼脂糖凝胶电泳后将放大的DNA直接用溴化乙锭染色，并检查了该方法是否可以应用于实际的取证材料。当比较通过增加与血液无关的40位健康日本人的血液中提取的基因组DNA增加的快速检测方法的结果和正常方法开发的结果时，正常方法允许从一个映射中确定至少60个代码，而快速检测方法则可以确定41个代码的平均代码。此外，当将快速检测应用于血迹时，平均而言，可以准确地从39个代码中准确读取从3个月中六个人的血迹中提取的DNA。尽管该方法比常规方法检测到的代码略少，但发现它是一种简单，快速和可靠的方法，并且有望应用于法医法医知识实践。