急性GVHD大腸病変におけるapoptosisとサイトカインの分子・病理学的解析

急性GVHD结肠病变细胞凋亡和细胞因子的分子和病理分析

基本信息

批准号：
06770175
负责人：
鈴木美奈子
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Aichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770175/
关键词：
急性GVHD apoptosis DNA fragmentation TUNEL

项目摘要

副組織適合遺伝子のみが異なるマウス間で同種骨髄移植(BMT)を行い、致死的な急性graft-versus-host disease(GVHD)を惹起しBMT後28日目迄の大腸病変を探索した。(材料および方法)レシピエントに放射線照射後、骨髄細胞と脾細胞をそれぞれ1.0×10^7個ずつ投与したものをGVHD群とし、骨髄細胞1.0×10^7のみを投与したものをBM群とした。大腸腺上皮傷害とapoptosisの関わりを見る為にレシピエントマウスを経時的に屠殺し、摘出した大腸組織をホルマリン固定後、パラフィン包埋しapoptosisの指標となるDNA fragmentationの局在をnick end labeling(TUNEL)法を用いて組織切片上で明らかにした。(結果1)GVHD群では大腸腺上皮細胞間に浸潤する細胞は、BMT後12-17日目にピークに達し、その後減少するが、これとほぼ一致してnick end陽性細胞もBMT後12-17日目をピークに出現する。大腸腺上皮傷害の程度もこれらの細胞の出現と比較的一致している。リンパ球、あるいは腺上皮細胞にnick end陽性所見がみられ、apoptotic bodyやapoptosisと思われる細胞にも陽性所見が認められた。一方BM群では、GVHD群と比較してピーク時に於いては明らかにnick end陽性細胞は少なく腺上皮傷害も殆ど見られなかった。(結果2)サイトカインについての検索は、IL-1αについて行った。PLP固定後、OCTコンパウンド包埋し凍結切片を作製し、抗IL-1α抗体で染色したところ、抗体がポリクローナルなのでバックグランドが出てしまい、あまり良い染色結果は得られなかった。現在改良を加えて検討中である。(結果3)更にIL-1αのgeneをPCRにて増幅し、in situ hybridizationを行う為にプローブを作製している段階である。

我们在仅辅助组织相容性基因不同的小鼠之间进行了同种异体骨髓移植 (BMT)，诱导致命性急性移植物抗宿主病 (GVHD)，并在 BMT 后长达 28 天的时间内研究了结肠病变。 (材料与方法)受者接受放射线照射后，给予受者1.0 x 10^7骨髓细胞和脾细胞作为GVHD组，仅给予1.0 x 10^7骨髓细胞作为BM组。做过。为了检查结肠腺上皮损伤和细胞凋亡之间的关系，随着时间的推移处死受体小鼠，将切除的结肠组织固定在福尔马林中并包埋在石蜡中，使用TUNEL方法在组织切片上显示这一点。 (结果1)GVHD组中，结肠腺上皮细胞间浸润的细胞数在BMT后第12～17天达到峰值，其后减少，在第17天达到峰值。结肠腺上皮损伤的程度也与这些细胞的外观相对一致。在淋巴细胞或腺上皮细胞中观察到Nick端阳性结果，在看似凋亡小体或凋亡的细胞中也观察到阳性结果。另一方面，在BM组中，与GVHD组相比，峰值时的切口末端阳性细胞明显较少，并且几乎没有观察到腺上皮的损伤。 (结果2)针对IL-1α进行细胞因子的探索。 PLP固定后，通过包埋在OCT化合物中制备冷冻切片并用抗IL-1α抗体染色，但由于该抗体是多克隆的，出现背景，并且没有获得很好的染色结果。目前正在考虑改进。 (结果3)我们也正处于通过PCR扩增IL-1α基因并制作用于原位杂交的探针的阶段。