G蛋白機能制御型ダイノルフィン受容体ミュータントリコンビナント蛋白の情報伝達

G蛋白功能调节强啡肽受体突变重组蛋白信息传递

• 批准号: 06780656
• 负责人: 福嶋 伸之
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780656/
• 关键词: ダイノルフィン; Gタンパク質; オピオイド受容体; モルモット小脳

ダイノルフィンをはじめとするオピオイド_Kサブタイプのアゴニストはその受容体に結合しG蛋白を抑制することを報告してきた。さらに、モルモット小脳cDNAライブラリーから本受容体(ダイノルフィン受容体)遺伝子のクローニングに成功した。本研究では、ミュータント受容体をアタリカツメガエル卵母細胞に発現させダイノルフィン受容体のリガンド結合にかかわるドメインを調べた。また、本受容体はダイノルフィンやU69593(_Kアゴニスト)に対して非常に高い親和性を有す。そこで、モルモット小脳におけるダイノルフィン結合との比較を行った。1.ダイノルフィン受容体のN末端あるいはC末端に1アミノ酸置換した受容体DNAを作成した。これらの受容体を卵母細胞に発現させ[^<125>l]-ダイノルフィンをリガンドとして結合実験から、ダイノルフィン受容体のNおよびC末端がリガンド結合に重要であることが示唆された。2.小脳膜へのダイノルフィン結合は、従来報告されている高親和性結合(Kd=1.8nM)に加えてさらに高い親和性を示す結合部位(Kd=50pM)が認められた。U69593は非常に低濃度でこの後者の結合を阻害し、そのKiは20pMであった。この値は卵母細胞に発現されたダイノルフィン受容体へのKi値(40pM)と同等であった。これらのことから、モルモット小脳で見られるダイノフィン結合に本受容体が関与している可能性が示唆された。

据报道，阿片_K 亚型激动剂（包括强啡肽）与其受体结合并抑制 G 蛋白。此外，我们成功地从豚鼠小脑 cDNA 文库中克隆了该受体（强啡肽受体）的基因。在这项研究中，我们在非洲爪蟾卵母细胞中表达了一种突变受体，并研究了参与强啡肽受体配体结合的结构域。此外，该受体对强啡肽和 U69593（_K 激动剂）具有非常高的亲和力。因此，与豚鼠小脑中的强啡肽结合进行了比较。 1.受体DNA是在强啡肽受体的N端或C端进行单个氨基酸取代而产生的。在卵母细胞中表达这些受体后使用[1251]-强啡肽作为配体的结合实验表明强啡肽受体的N-和C-末端对于配体结合很重要。 2.关于强啡肽与小脑膜的结合，除了先前报道的高亲和力结合(Kd=1.8nM)之外，还观察到显示出更高亲和力(Kd=50pM)的结合位点。 U69593 在非常低的浓度下抑制后一种结合，Ki 为 20 pM。该值相当于卵母细胞中表达的强啡肽受体的 Ki 值 (40 pM)。这些发现表明，该受体可能参与在豚鼠小脑中观察到的强啡肽结合。

项目成果

N.Fukushima: "Species and age-dependent ditterences of fuuctional coupling betueen opioid δ-receptor and G-proteins and possible inuolrenent of protein kinase C in stri et al membranes." Neuroscience Letters. 176. 55-58 (1994)

N. Fukushima：“甜菜素阿片 δ 受体和 G 蛋白的功能耦合的物种和年龄依赖性差异以及 stri 等人膜中蛋白激酶 C 的可能影响。”176. 55-58 (1994)。

N.Fukushima: "A New high attinity dynorphin A binding site in the guinea pig cerebellum." Neuroscierce Research. 19. S59- (1994)

N.Fukushima：“豚鼠小脑中的一个新的高亲和力强啡肽 A 结合位点。”