神経細胞コミュニティーに働く液性生存維持因子とその受容体クローニング

克隆体液存活因子及其作用于神经元群落的受体

基本信息

批准号：
06272227
负责人：
福嶋伸之
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06272227/
关键词：
生存維持因子神経細胞死培養上清

项目摘要

神経細胞の生存を維持する液性因子を神経細胞の上清中に見い出し、その同定および抗体作成を目的として研究を行った。胎生17日のラット大脳皮質より調製した神経細胞を低密度で蒔き無血清下で一日培養すると、ほとんどの細胞が死滅する。これに対し、高密度(低密度の5倍の密度)で培養した時、細胞の生存が維持された。高密度培養した時の培養上清を低密度培養系に加えても、同様に生存が維持された。これらのことより、培養上清中に液性生存維持因子(細胞死抑制因子)が存在していることが示唆された。上清中に含まれる生存因子の生存維持活性は、酸性下での熱処理や凍結融解により影響を受けなかったが、熱処理やProteinaseK処理により約60%減少した。このことから、生存維持因子の少なくとも一部は蛋白性であることが分かった。低密度培養系においてNGF、aFGF、bFGF、EGF、LamininあるいはFibronectinのような既存の生存維持因子は無効であった。さらに培養上清中の生存維持活性は、ゲルろ過クロマトグラフィーおよびSDS-PAGEにおいてそれぞれ分子量45kDaおよび20と22kDaのところに認められた。以上のことから、今回見い出された生存維持因子は、既知のものとは異なる新規物質の可能性が考えられる。これらの因子の大量精製を行い、現在一次構造を解析中である。さらに、これらのモノクロナール抗体の作成を進めている。特に中和抗体は、本因子の神経細胞コミュニティーにおける役割を調べる上で重要な鍵となると期待される。

我们在神经细胞上清液中发现了一种维持神经细胞存活的体液因子，并进行了研究以识别它并产生抗体。当从 17 日龄大鼠大脑皮层制备的神经元以低密度铺板并在没有血清的情况下培养一天时，大多数细胞死亡。相反，当以高密度（低密度密度的5倍）培养时，细胞存活得以维持。即使将来自高密度培养物的培养物上清液添加到低密度培养系统中，也同样维持存活。这些结果表明，培养上清液中存在体液存活维持因子（细胞死亡抑制因子）。上清液中所含存活因子的存活维持活性不受酸性条件下的热处理或冻融的影响，但通过热处理和蛋白酶K处理降低约60%。这表明至少一部分生存维持因子是蛋白质的。现有的生存因子，如 NGF、aFGF、bFGF、EGF、层粘连蛋白或纤连蛋白在低密度培养系统中无效。此外，在凝胶过滤色谱和SDS-PAGE中，分别在45kDa和20kDa和22kDa的分子量下观察到培养上清液中的存活活性。综上所述，此次发现的生存维持因子有可能是一种与已知物质不同的新物质。我们已经纯化了大量这些因子，目前正在分析它们的主要结构。此外，我们正在继续创建这些单克隆抗体。特别是，中和抗体预计将成为研究该因子在神经元群落中的作用的重要关键。