ニワトリ胚肢芽進行帯細胞に特異的なタンパク質に対する免疫学的な解析

鸡胚肢芽进展区细胞特异性蛋白质的免疫学分析

基本信息

批准号：
06780604
负责人：
渡邉明彦
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Yamagata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

塩基性繊維芽細胞増殖因子(basic Fibroblast Growth Factor;bFGF)で処理をした肢芽進行帯中胚葉の初代培養細胞をホモジェナイズし、これを抗原としてマウスとウサギに免疫を行った。これらの動物から得られた抗血清を用いてウエスタンブロッティングを行ったところ、抗血清に含まれる抗体と結合する複数のタンパク質が抗原中に検出された。次に、bFGFで処理をしていない肢芽進行帯中胚葉の初代培養細胞を用いて抗血清の吸収処理を行った。この結果bFGF処理を行った細胞に特異的に見られる4種類のタンパク質を検出することに成功した。これらのタンパク質のおよその分子量はすべて97kDa以上であり、このうちの一つはその発現パターンからAV-1タンパク質であることがわかった。他の3つのタンパク質については未同定であり、未知の分子である可能性が考えられる。これらの分子を同定するためには抗体を用いた抗原の分析やそれらをコードする遺伝子の単離などが考えられるが、これらを行うためには、吸収操作を省略してより高い結合能を持つ抗体の作成が必要である。現在、これらの未同定の分子に対するモノクローナル抗体を作成中である。本研究によって検出されたタンパク質は、肢芽の発生において外胚葉性頂堤(Apical Ectoderm-al Ridge:AER)の作用によって発現が維持されるものであることが強く示唆される。AERは肢の骨のパターンを形成するために重要な領域の一つであり、今回の結果はAERの作用機構を解明するための重要な手がかりとなるものである。

将用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)处理的肢芽进展区中胚层的原代培养细胞匀浆，并以此作为抗原免疫小鼠和兔。当使用从这些动物获得的抗血清进行蛋白质印迹分析时，在抗原中检测到了与抗血清中所含抗体结合的多种蛋白质。接下来，使用未经bFGF处理的原代培养的肢芽进展区中胚层细胞进行抗血清吸收处理。结果，他们成功检测到用 bFGF 处理的细胞中特有的四种蛋白质。这些蛋白质的大致分子量均在97 kDa或更高，根据其表达模式发现其中之一是AV-1蛋白质。其他三种蛋白质尚未被鉴定，可能是未知分子。为了识别这些分子，可以使用抗体分析抗原并分离编码它们的基因，但是为了做到这一点，有必要省略吸收操作并开发具有更高结合能力的方法。来产生抗体。我们目前正在开发针对这些未知分子的单克隆抗体。强烈表明本研究中检测到的蛋白质的表达是通过肢芽发育过程中顶端外胚层脊（AER）的作用来维持的。 AER是形成肢体骨模式的重要区域之一，本研究结果为阐明AER的作用机制提供了重要线索。