DNA結合タンパク質の新規なドメインを推定されるLAQボックスの構造と機能

LAQ盒的结构和功能被预测为DNA结合蛋白的新结构域

基本信息

批准号：
06780477
负责人：
柳澤修一
金额：
$ 0.7万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780477/
关键词：
DNA結合タンパク質 DNA結合ドメイントウモロコシ転写因子

项目摘要

トウモロコシのDNA結合タンパク質MNBlaは既知のタンパク質とは相同性が見られず、新規なタイプのDNA結合タンパク質ではないかと推定されている。MNBlaはカリフラワーモザイクウィルスの35Sプロモーター上のAAGGモチーフに塩基配列特異的に結合し、その遺伝子は多重遺伝子群に属している。先に、トウモロコシからMNBlaと相同性を有するcDNAを2種類クローン化し、ごく一部の領域にのみ3つのクローン間で高い相同性が見られることを明らかにしている。今回、MNBlaの様々な領域をβ-ガラクトシダーゼとの融合タンパク質として発現させ、そのDNA結合能を調べたところ、先の保存領域がDNA結合に重要な領域であることが明らかとなった。また、MNBla多重遺伝子群に由来する染色体DNAクローンを2種類単離し、解析を行ったところ、いずれのクローンもMNBla遺伝子そのものを含んではいなかったが、いずれもMNBlaの先の保存領域のすぐ下流の領域のみを有していることが明らかとなった。いずれのクローンもこの領域が転写されることが確認されたので、MNBla多重遺伝子群がエクソン-シャフリングによって進化してきた可能性を示唆するものであると考えている。さらに、MNBlaの機能を検討するために、エレクトロポレーション法を用いた解析を行った(Dr.Sheen,Harvard大との共同研究)。PPDKプロモーターの支配下にMNBlaのsence strandあるいはanti-sence strandを発現するプラスミドと、MNBlaの結合部位と35Sプロモーター(-72まで)とCAT遺伝子を連結したプラスミドを作成し、これをトウモロコシの葉のプロトプラストにco-transfectionしたところ、sence strandの発現に依存した約2倍程度のCAT活性の上昇が見られ、MNBlaは転写を促進する可能性が示唆された。

玉米DNA结合蛋白MNBla与已知蛋白质没有同源性，推测是一种新型DNA结合蛋白。 MNBla以序列特异性方式与花椰菜花叶病毒35S启动子上的AAGG基序结合，该基因属于多基因组。此前，他们从玉米中克隆了两种与MNBla具有同源性的cDNA，并发现这三个克隆之间仅在少数区域观察到了高度同源性。这次，我们将MNBla的各个区域表达为与β-半乳糖苷酶的融合蛋白，并检查了它们的DNA结合能力，结果发现上述保守区域对于DNA结合很重要。此外，当我们分离并分析源自MNBla多基因簇的两种类型的染色体DNA克隆时，发现这些克隆均不含有MNBla基因本身，但均位于MNBla之外的保守区域的紧下游。很明显，该地区只有。由于该区域已被证实在所有克隆中转录，我们认为这表明 MNBla 多基因组可能是通过外显子改组进化的。此外，为了研究MNBla的功能，我们使用电穿孔法进行了分析（与哈佛大学Sheen博士的共同研究）。我们创建了一个在PPDK启动子控制下表达MNBla正义链或反义链的质粒，以及一个连接有MNBla结合位点、35S启动子（最多-72）和CAT基因的质粒，这是当共转染到原生质体中时，观察到 CAT 活性增加了大约两倍，这取决于有义链表达，表明 MNBla 可能促进转录。