新規なタイプのZnフィンガーモチーフと考えられるDofドメインの構造と機能

Dof结构域的结构和功能，被认为是一种新型的锌指基序

基本信息

批准号：
07780592
负责人：
柳澤修一
金额：
$ 0.64万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780592/
关键词：
Znフィンガー HMGタンパク質転写因子 DNA結合タンパク質

项目摘要

転写制御因子に関する近年の研究は、転写因子は互いに類似した構造を持ち、その構造から幾つかのグループに分類される事を明らかにしてきている。トウモロコシのDNA結合タンパク質MNB1aは、既知のタンパク質と相同性を持たないタンパク質であり、Dofドメインと命名したユニークな領域がDNA結合領域であることを明らかにしている。この領域はZnフィンガー様モチーフを一つだけとりえるを明らかにしており、Dofドメインを持つタンパク質の構造と機能を明らかにする事を目的として解析を行った。MNB1aのDNA結合活性はキレーターによって阻害されることは既に確認してあるが、キレーターによって阻害されたDNA結合活性はZnイオンによって特異的に回復することを確認した。また、Dofドメイン中には5つのCysと1つのHisがある、最初の3つのcysに部位特異的変異を導入して活性に重要なアミノ酸残基を同定した結果、Dofドメインには、CX_2CX_<21>CX_2Cという、Znフィンガーがひとつ存在すると結論した。また、Dofタンパク質が互に相互作用するかどうかを融合タンパク質の系を用いて解析した結果、MNB1aは自分自身ともDof2とも、さらにはHMG1タンパク質とも相互作用することを見いだした。この相互作用はDofドメインが担っていることも明らかにし、従って、DofドメインはDNA結合だけでなくタンパク質-タンパク質相互作用も担うマルチ機能ドメインであることを明らかにした。

最近对转录调控因子的研究表明，转录因子具有相似的结构，并且可以根据其结构分为几类。玉米 DNA 结合蛋白 MNB1a 与任何已知蛋白质都没有同源性，并且已发现称为 Dof 结构域的独特区域是 DNA 结合区域。研究表明，该区域只能包含一个锌指状基序，我们分析了该区域，旨在阐明具有 Dof 结构域的蛋白质的结构和功能。尽管已经证实MNB1a的DNA结合活性被螯合剂抑制，但我们证实被螯合剂抑制的DNA结合活性被Zn离子特异性地恢复。此外，Dof结构域中有5个Cys和1个His，由于在前3个cys中引入了位点特异性突变并识别了对活性重要的氨基酸残基，因此Dof结构域具有CX_2CX_<我们得出的结论是，存在一个锌指称为 21>CX_2C。此外，通过使用融合蛋白系统分析Dof蛋白是否彼此相互作用，结果发现MNB1a与其自身、Dof2甚至HMG1蛋白相互作用。还揭示了 Dof 结构域负责这种相互作用，因此，揭示了 Dof 结构域是一个多功能结构域，不仅负责 DNA 结合，还负责蛋白质-蛋白质相互作用。