走化性ペプチドにより惹起される好中球の細胞内動的変化の可視化と解析

趋化肽诱导的中性粒细胞细胞内动态变化的可视化和分析

基本信息

批准号：
06772098
负责人：
萩原健一
金额：
$ 0.64万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ハチ毒由来の走化性ペプチドI-CP、ならびにそのN末端より7残基目のProをLysに置換した[Lys7]I-CPについて、モルモット腹腔より採取した好中球に対する作用の解析を行い、1)-4)の結果を得た。1)化学走化性を検討した(Boyden法による)ところ、I-CP、[Lys7]I-CPのいずれも好中球に走化性を惹起させた。活性の用量作用曲線は、コントロールに用いたformyl-Met-Leu-Phe(FMLP)と同様ベル型となり、最大作用を示すペプチド濃度はI-CP、[Lys7]I-CPともに約1x10^<-6>M(FMLPは約1x10^<-8>M)であった。2)活性酸素の産生能(チトクロームc法による)を、また、好中球内からのglucosaminidaseの放出(を基質として測定)を検討したところ、I-CPとFMLPが活性酸素の産生と酵素の放出を促したのに対して、[Lys7]I-CPはどちらの生物活性も示さなかった。また、好中球をIAP(百日咳毒素)前処理したあとペプチドを添加すると、I-CPやFMLPによる活性酸素の産生や酵素の放出は著しく低下した。3)好中球をI-CP、[Lsy7]I-CP、FMLPで刺激すると、数秒以内に細胞内カルシウムイオン濃度の上昇が観察された。ただし、FMLP刺激では上昇した細胞内カルシウムイオンレベルが持続的に維持されたのに対し、[Lys7]I-CPでは持続性の弱い(一過性の)カルシウムイオン濃度の上昇であった。I-CPは、この中間と見られるカルシウムイオン動員のパターンを示した。4)好中球をIAP(百日咳毒素)前処理したあとペプチドを添加すると、I-CPやFMLPでは立ち上がりの緩やかな細胞内カルシウムイオン濃度の上昇が観察されたのに対して、[Lys7]I-CPでは細胞内カルシウムイオン濃度の上昇が全く起こらなかった。[Lys7]I-CPは‘走化性だけを示す'ことから、走化性発現に必要とされる細胞内情法伝達機構の解析に有用であると期待される。本研究では、[Lys7]I-CPによる細胞内カルシウムイオン動員が他と異なっていることが明らかとなった。今後、さらに検討を加えていくつもりである。

分析从豚鼠腹腔收集的中性粒细胞的影响，豚鼠是从蜜蜂毒药中获得的亚军I-CP，以及来自其N末端的第7个Pro [Lys7] I-CP，1 ）-4）。 1）在检查化学运行特性（根据Boyden方法）时，I-CP和[Lys7] I-CP都吸引了良好的中性粒细胞。活性剂量曲线是钟形曲线，例如用于对照的甲基 - met-leu-phe（FMLP），表明最大效应的肽浓度约为1x10^< - 对于I-CP和[Lys7] I-CP。 2）当活性氧的生产能力（根据Chitochrome C方法）和从中性球体中释放葡萄糖酰胺酶（以底物为基材）时，I-CP和FMLP的产生并促进活性氧气。释放，[Lys7] I-CP没有显示任何生物学活性。在预处理IAP（pertiature咳嗽毒素）后加入肽后，I-CP和FMLP的活性氧的产生，并且酶的释放显着降低。 3）用I-CP，[LSY7] I-CP和FMLP刺激中性粒细胞，在几秒钟内观察到细胞内钙离子浓度的增加。然而，在FMLP刺激中，连续保持内部钙离子水平上升，而[Lys7] I-CP是钙离子浓度的增加，弱（瞬态）弱（瞬态）弱点。 I-CP显示了中间考虑的钙离子动员的模式。 4）当加工良好的中性球之前IAP（pertiature咳嗽毒素）之前，添加了肽，并观察到I-CP和FMLP观察到上升的上升升高的升高细胞钙离子浓度，但[Lys7] II II II -CP根本没有增加内部钙离子浓度。 [LYS7] I-CP有望可用于分析运行属性所需的细胞诱导机制，因为它仅显示运行属性。这项研究表明，[Lys7] I-CP与其他I-CP不同。将来，我将继续考虑。