ヒト線維芽細胞由来がん細胞遊走促進因子の同定とそれに対する抗体作製

人成纤维细胞来源的癌细胞迁移促进因子的鉴定和针对它们的抗体的产生

• 批准号: 06771660
• 负责人: 林堂 安貴
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771660/
• 关键词: がん浸潤; 細胞遊走促進因子; 上皮-間葉相互作用; 線維芽細胞

これまでin vitro浸潤モデルを用いて口腔癌の浸潤増殖機構に与える線維芽細胞の影響について解析を行い、線維芽細胞の産生する液性因子が口腔癌の細胞遊走を強く促進することを見いだした。本研究では線維芽細胞培養上清より癌細胞の遊走を促進する因子の分離しその作用機序の解析を行った。線維芽細胞の培養上清を限外濾過にて濃縮後、FPLCシステムを用いてSuperdex 200pgカラムに展開・溶出させた。その結果、50〜70kDaの画分に口腔癌細胞遊走促進活性が認められた。さらに同画分をヘパリン親和性カラム、Mono Qカラム等を用いて精製を進めたところ、熱及び還元に比較的安定な約50kDaの蛋白が分離された。同蛋白の遊走活性は抗β1インテグリン抗体やGRGDS及びYIGSRによって影響を受けないことから細胞外基質蛋白とは区別され、精製過程や生化学的性質より既知の成長因子とは異なる新しい蛋白であることが示唆された。同蛋白は口腔癌細胞のストレスファイバーの形成を抑制し、細胞膜のラッフリング引き起こすことがわかった。さらに本蛋白の遊走活性はチロシンキナーゼ阻害物質のゲニステインで強く抑制されることより、その作用発現にチロシンキナーゼによる細胞蛋白のリン酸化の関与が推測された。また、本蛋白は百日咳毒素によってその活性が阻害された。以上の結果より、線維芽細胞の産生するがん細胞遊走促進因子はGi蛋白共役受容体を介してチロシンキナーゼを活性化し細胞骨格系を制御して細胞の運動能を亢進させていると考えられた。

我们之前通过体外侵袭模型分析了成纤维细胞对口腔癌侵袭和增殖机制的影响，发现成纤维细胞产生的体液因子强烈促进口腔癌的细胞迁移。在本研究中，我们从成纤维细胞培养上清液中分离出促进癌细胞迁移的因子，并分析了它们的作用机制。通过超滤浓缩成纤维细胞培养上清液后，使用 FPLC 系统在 Superdex 200pg 柱上展开并洗脱。结果，在50-70kDa级分中观察到口腔癌细胞迁​​移促进活性。当使用肝素亲和柱、Mono Q柱等进一步纯化同一级分时，分离出对热和还原相对稳定的约50kDa的蛋白质。该蛋白的迁移活性不受抗β1整合素抗体、GRGDS或YIGSR的影响，因此与细胞外基质蛋白区别，并且由于其纯化过程和生化特性，它是一种不同于已知生长因子的新蛋白被建议。人们发现这种蛋白质可以抑制口腔癌细胞中应力纤维的形成，并导致细胞膜皱起。此外，该蛋白的迁移活性被酪氨酸激酶抑制剂金雀异黄素强烈抑制，表明酪氨酸激酶对细胞蛋白的磷酸化可能参与其作用的表达。此外，该蛋白的活性被百日咳毒素抑制。基于上述结果，认为成纤维细胞产生的癌细胞迁移促进因子通过Gi蛋白偶联受体激活酪氨酸激酶，控制细胞骨架系统，增强细胞运动性。

项目成果

林堂 安貴: "口腔扁平上皮癌の浸潤増殖における上皮成長因子(EGF)と線維芽細胞の関与." 大阪大学歯学雑誌. 36. 483-500 (1991)

Yasuki Lindo：“表皮生长因子 (EGF) 和成纤维细胞参与口腔鳞状细胞癌的侵袭性生长。” 大阪大学牙科杂志 36. 483-500 (1991)

Hayashido Y: "Effect of epidermal growth factor on invasion of human squamous cell carcinoma cells into collagen gel." The Cancer J.4. 257-261 (1991)

Hayashido Y：“表皮生长因子对人鳞状细胞癌细胞侵入胶原凝胶的影响。”

Shirasuna K: "Immunohistochemical localization of epidermal growth factor(EGF)and EGF receptor in human oral mucosa and its malignancy." Virchows Archiv A Pathol Anat.418. 349-353 (1991)

Shirasuna K：“人类口腔粘膜中表皮生长因子（EGF）和 EGF 受体的免疫组织化学定位及其恶性肿瘤。”

Shirasuna K: "Extracellular matrix production and degradation by adenoid cystic carcinoma cells:participation of plasminogen activator and its inhibitor in matrix degradation." Cancer Res.53. 147-152 (1993)

Shirasuna K：“腺样囊性癌细胞的细胞外基质产生和降解：纤溶酶原激活剂及其抑制剂参与基质降解。”