ヒト線維芽細胞由来がん細胞遊走促進因子の同定とそれに対する抗体作製

人成纤维细胞来源的癌细胞迁移促进因子的鉴定和针对它们的抗体的产生

• 批准号: 06771660
• 负责人: 林堂 安貴
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771660/
• 关键词: がん浸潤; 細胞遊走促進因子; 上皮-間葉相互作用; 線維芽細胞; がん浸潤; 細胞遊走促進因子; 上皮-間葉相互作用; 線維芽細胞

これまでin vitro浸潤モデルを用いて口腔癌の浸潤増殖機構に与える線維芽細胞の影響について解析を行い、線維芽細胞の産生する液性因子が口腔癌の細胞遊走を強く促進することを見いだした。本研究では線維芽細胞培養上清より癌細胞の遊走を促進する因子の分離しその作用機序の解析を行った。線維芽細胞の培養上清を限外濾過にて濃縮後、FPLCシステムを用いてSuperdex 200pgカラムに展開・溶出させた。その結果、50〜70kDaの画分に口腔癌細胞遊走促進活性が認められた。さらに同画分をヘパリン親和性カラム、Mono Qカラム等を用いて精製を進めたところ、熱及び還元に比較的安定な約50kDaの蛋白が分離された。同蛋白の遊走活性は抗β1インテグリン抗体やGRGDS及びYIGSRによって影響を受けないことから細胞外基質蛋白とは区別され、精製過程や生化学的性質より既知の成長因子とは異なる新しい蛋白であることが示唆された。同蛋白は口腔癌細胞のストレスファイバーの形成を抑制し、細胞膜のラッフリング引き起こすことがわかった。さらに本蛋白の遊走活性はチロシンキナーゼ阻害物質のゲニステインで強く抑制されることより、その作用発現にチロシンキナーゼによる細胞蛋白のリン酸化の関与が推測された。また、本蛋白は百日咳毒素によってその活性が阻害された。以上の結果より、線維芽細胞の産生するがん細胞遊走促進因子はGi蛋白共役受容体を介してチロシンキナーゼを活性化し細胞骨格系を制御して細胞の運動能を亢進させていると考えられた。

到目前为止，使用体外侵袭模型来分析成纤维细胞对口腔癌侵袭和增殖机制的影响，我们发现成纤维细胞产生的体液因子在口腔癌中强烈促进细胞迁移。在这项研究中，我们分离了促进癌细胞从成纤维细胞上清液中迁移的因素，并分析了作用机理。通过超滤浓缩成纤维细胞的培养上清液，然后使用FPLC系统开发并洗脱到超级dex 200pg柱上。结果，50-70 kDa的馏分显示出促进口腔癌细胞迁​​移的活性。此外，使用肝素亲和力柱，单声道Q柱等纯化了相同的部分，并且分离了约50 kDa的蛋白质，该蛋白质相对稳定，可与热量和还原相对稳定。该蛋白的迁移活性不受抗β1整联蛋白抗体，GRGD和YIGSR的影响，因此它与细胞外基质蛋白有所不同，并且建议它是一种与已知生长因子不同的新蛋白，其纯化过程和生物化学特性。发现该蛋白质抑制了口腔癌细胞中应激纤维的形成，并导致细胞膜的抽奖。此外，该蛋白的迁移活性被酪氨酸激酶抑制剂Genastein强烈抑制，并推测酪氨酸激酶对细胞蛋白的磷酸化与其作用有关。此外，百日咳毒素抑制了该蛋白的活性。从上述结果中可以认为，由成纤维细胞产生的癌细胞迁移启动子通过胃蛋白偶联受体激活酪氨酸激酶，控制细胞骨架系统并增加细胞的运动性。