造血障害疾患における膜結合型SCF/c-kit系の解析-骨髄異形成症候群を中心に-

膜结合 SCF/c-kit 系统在造血障碍中的分析 - 关注骨髓增生异常综合征 -

• 批准号: 06770838
• 负责人: 辻野 志穂
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770838/
• 关键词: SCF; transfectant; 液体培養; コロニー形成; 骨髄異形成症候群

Stem cell factor(SCF)は、幼若な造血幹細胞の維持増殖に関与する造血因子である。我々は、すでにこのSCFの受容体であるc-kit陽性細胞存在下でSCFとIL-6が相乗的にマウスの骨髄細胞を長期的に維持、増殖させることを報告しているが、今回、ヒト骨髄細胞を用いて検討した。(1)ヒトSCF遺伝子を導入したtransfectantの作製:Hela細胞のmRNAより3種類のmRNA(whole,membrane-bound,soluble)を分離し、cDNAを作製し、pBCMGneoに組み込んだ。この遺伝子をlipofectin法によりS1/S1マウスの胎児より作成したfibroblastS1/S1 3T3に遺伝子導入してtransfectantを得た。このtransfectantのなかからPCRによりSCF発現の高いクローンを3種(A,B,C)を得た。(2)そのなかのクローンAを用いて、液体培養系での実験を行った。クローンAをconfluentの状態に保ち、この上に正常人およびMDS患者骨髄細胞を一定数播種し、培養した。7日後に全細胞を回収しmethylcellurose法でコロニー形成能を測定した。その結果、MDS5名の内、4名に有意にコロニー形成能の低下をみた。このことは、MDS患者の骨髄では、SCF/c-kit系の伝達系に異常があることを示唆する。今後さらに症例を増やすとともに、再生不良生貧血患者や骨髄増殖性疾患患者の骨髄細胞についての検討を行っていきたい。(3)膜結合型変異遺伝子のtransfectantの作成:上述のcDNAのmutagenesisをおこさせることを試みたが現段階では成功していない。

干细胞因子（SCF）是造血因素，涉及维持和增殖的年轻造血干细胞。我们已经报道说，SCF和IL-6已经在协同的C-KIT阳性细胞中维持和增殖的小鼠骨髓细胞，这是该SCF的受体。 （1）由引入人类SCF基因的转移剂制成：三种类型的mRNA（整个，膜结合，可溶性）与HeLa细胞的mRNA分离，创建了cDNA并将其掺入PBCMGNEO中。该基因是通过将基因引入脂肪蛋白方法从S1/S1小鼠胎儿产生的纤维细胞1/S1 3T3来给予转染剂的。从该转染剂中，PCR获得了三种具有高SCF表达的克隆（A，B，C）。 （2）使用克隆A中的液体培养中进行了实验。克隆A处于汇合状态，并播种并播种了一定数量的Nermos和MDS患者骨髓细胞。七天后，收集了所有细胞，并通过甲基尿素法测量了菌落形成。结果，我们签署了菌落形成的显着降低到五个MDS中的四个。这表明SCF/C-KIT传输系统在MDS患者的骨髓中异常。我们想增加将来的病例数，并考虑不良再生性贫血和骨髓增殖的患者的骨髓细胞。 （3）创建用于膜型突变基因的转染剂：我试图在上述cDNA中进行诱变，但在此阶段尚未成功。