両生類胚のアクチビンとレチノインさんの共同作用による分化に関する免疫組織化学的研究

激活素和视黄酸联合作用对两栖动物胚胎分化的免疫组织化学研究

基本信息

批准号：
05780551
负责人：
内山英穂
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ツメガエル・アクチビンAおよびアクチビンB、ツメガエル・フォリスタチンについては、親水性の部域を検討して、アクチビンについてはC末端近く、フォリスタチンについては中央部分で13〜15merのペプチドを化学合成した。これをBSAにコンジュケードしてウサギ抗血清を得て、ペプチドカラムにより抗体を精製した。ツメガエル卵をPFAにより固定して免疫電顕を行ったところ、卵黄顆粒に有意な金コロイドのシグナルが検出された。動物極側、植物極側、背側、腹側でシグナルの密度に大きな差異は見られなかった。これらのシグナルはペプチドによる吸収で消えた。このことは、ツメガエル卵においては、アクチビンとフォリスタチンが卵黄顆粒に存在する可能性を示す。一方、東京大学・浅島研究室の福井らとの共同研究で、ツメガエルの初期胚のHPLCフラクションのEDF活性を測定したところ、3つのピークをもつEDF活性が検出され、リテンションタイムから考えて、ツメガエル初期胚にはアクチビンA,AB,Bの3種類が全て含まれるものと考えられた。また、それらを大きく上回るフォリスタチンの存在が福井より示された。ツメガエル・レチノイン酸レセプターalphaに対するペプチド抗体も作成された。クリオスタット切片で抗原の局所を調べたとこら、胚全体の核にシグナルが検出され、原腸期の神経外胚葉、陥入した中胚葉部域にやや強いシグナルが見られた。こららの結果から、母性誘導因子、あるいはそのレセプターであるアクチビンとレチノイン酸レセプターは、発生のごく初期の段階ではっきりとした局在をもとものではなく、卵全体に広がって存在していることが考えられる。

关于非洲爪蟾激活素 A 和激活素 B 以及非洲爪蟾卵泡抑素，我们研究了激活素 C 末端附近的亲水区域和化学合成的 13-15 聚体肽以及卵泡抑素中心区域的化学合成肽。将其与BSA缀合以获得兔抗血清，并使用肽柱纯化抗体。当非洲爪蟾卵用 PFA 固定并进行免疫电子显微镜检查时，在蛋黄颗粒中检测到显着的胶体金信号。动物极、植物极、背侧和腹侧之间的信号密度没有显着差异。这些信号在被肽吸收后消失。这表明激活素和卵泡抑素可能存在于爪蟾卵的蛋黄颗粒中。另一方面，在与东京大学浅岛实验室的 Fukui 等人的联合研究中，我们测量了早期非洲爪蟾胚胎的 HPLC 部分中的 EDF 活性，检测到了三个峰，并考虑了保留时间。人们认为早期胚胎含有所有三种类型的激活素 A、AB 和 B。福井还证明了卵泡抑素的存在，远远超过了这些。还产生了针对非洲爪蟾视黄酸受体α的肽抗体。当使用低温切片检查抗原的定位时，在整个胚胎的细胞核中检测到信号，在原肠胚阶段的神经外胚层和内陷中胚层区域中观察到稍强的信号。这些结果表明，母体诱导因子或其受体、激活素和视黄酸受体并未明确定位于发育的早期阶段，但可能存在于整个卵中。