下等脊椎動物および無脊椎動物の初期発生におけるアクチビン関連分子の役割

激活素相关分子在低等脊椎动物和无脊椎动物早期发育中的作用

基本信息

批准号：
08254216
负责人：
内山英穂
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08254216/
关键词：
アフリカツメガエル中胚葉誘導アクチビン

项目摘要

本研究ではアフリカツメガエル胚の発生におけるアクチビンの役割をさらに探るため、はじめに抗アクチビン抗体を作成して胚中でのアクチビン様抗原の分布を調べ、次いでアクチビンの活性を抑制する遺伝子の過剰発現を行って、胚発生への影響を調べた。まずアクチビンAおよびBのC末端側のアミノ酸13残基に対するウサギ抗血清をアフィニティー精製し,交差性の見られない抗体を得た.この抗体を用いてツメガエル成体脳下垂体を染色した。抗アクチビンA抗体は下垂体の一部を弱く染めただけだったが、抗アクチビンB抗体は脳下垂体前葉を幅広く染色した。この染色される細胞は、LH細胞、TSH細胞、GH細胞であった。この結果はラットや金魚との共通点を含みながらも相違点をもっていた。同抗体を用いて卵母細胞および胚を染色すると、胚全体にシグナルが見られ,背側および腹側陥入部位の染色がやや強かった。電子顕微鏡による観察の結果、染色部位の少なくとも一部は卵黄小板内であった。次にドミナントネガティブアクチビン受容体のmRNAの注射を行った。背側帯域に注射すると、尾が短縮し2本に別れて背側へと反り返った。植物極に注射すると頭部及び眼の縮小が見られ,腹側帯域に注射すると、適度なdoseの時に2次胚が形成された。フォリスタチンを背側帯域および植物極に注射したときには陥入阻害が見られ、尾が縮小して腹側へ湾曲した。腹側帯域に注射すると、2次胚の形成が見られた。この2次胚の内部には、体節、前腎、間充織、脊索が見られた。フォリスタチンによる2次胚形成能は、BMP4mRNAの同時注入により抑制された。フォリスタチンを腹側帯域に注射すると、注射部位にgoosecoidやNCAMが発現すること、およびBMP4の同時注射によりこれらの遺伝子発現が抑えられることがわかった。

在本研究中，为了进一步探讨激活素在非洲爪蟾胚胎发育中的作用，我们首先创建了抗激活素抗体并研究了激活素样抗原在胚胎中的分布，然后过表达了抑制激活素活性的基因。研究了对胚胎发育的影响。首先，对激活素A和B的C端13个氨基酸残基的兔抗血清进行亲和纯化，获得无交叉反应性的抗体。该抗体用于对成体非洲爪蟾垂体进行染色。抗激活素A抗体仅对垂体的一部分进行微弱染色，而抗激活素B抗体对垂体前叶的大面积染色。待染色的细胞是LH细胞、TSH细胞和GH细胞。尽管这些结果与大鼠和金鱼有相似之处，但也存在差异。当卵母细胞和胚胎用相同的抗体染色时，在整个胚胎中都可以看到信号，背侧和腹侧内陷的染色稍强。使用电子显微镜观察的结果，染色部位的至少一部分位于卵黄血小板内。接下来，注射显性失活激活素受体 mRNA。当注射到背部区域时，尾巴缩短，一分为二，并在背部呈拱形。当注射到植物极时，观察到头部和眼睛缩小，当注射到腹侧区时，中等剂量时形成次生胚胎。当将卵泡抑素注射到背区和植物极时，观察到内陷抑制，尾部收缩并向腹侧弯曲。当注射到腹侧区时，观察到二次胚胎的形成。在这个次级胚胎中，发现了体节、前肾、间充质和脊索。共注射 BMP4 mRNA 抑制了卵泡抑素诱导的形成次生胚胎的能力。我们发现，当将卵泡抑素注射到腹侧区时，注射部位会表达 goosecoid 和 NCAM，并且同时注射 BMP4 会抑制这些基因的表达。