歯周炎病巣局所におけるリンパ球の遊走・定着機構の解析歯肉線維芽細胞に対するBリンパ球の接着に関与する分子機構の解析

局部牙周炎病灶淋巴细胞迁移沉降机制分析 B淋巴细胞与牙龈成纤维细胞粘附的分子机制分析

基本信息

批准号：
05771589
负责人：
村上伸也
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

炎症歯周組織へBリンパ球が定着・集積する分子機構を解明する目的で、歯肉の主要構成細胞の1つである線維芽細胞(FB)および同細胞が産生する細胞外マトリックス(BCM)に対するBリンパ球の接着能がどのような制御を受けているのかを解析した。研究実施計画に従い、まずマウスの正常B細胞及び種々のクローン化されたBリンパ球系腫瘍細胞を指標細胞として用いた。そしてこれらの指標細胞を刺激することにより、ヒアルロン酸(HA)、フィブロネクティン(FN)およびFBに対する指標細胞の接着にいかなる影響が及ぼされるかを詳細に検討した。その結果、マウスBリンパ球系細胞をPorbol 12-myristate 13-acetate(PMA)、IL-5、Lipopolysaccharide(LPS)などのBリンパ球の増殖・分化を誘導する刺激で活性化するとこれら細胞のFN及びHAに対する接着能の誘導が認められた。しかしB細胞の初期活性化のみ惹起し得るIL-4ではいずれのECMに対する接着能も誘導しなかった。このことよりB細胞の活性化段階とECMに対する接着能の問に重要な関連性が存在することが示唆された。また、細胞接着分子特異的単クローン抗体を用いた接着阻害実験より、Bリンパ球系細胞のFN,HAに対する接着はそれぞれVLA-4,CD44分子により担われていることが確認された。興味深いことに、VLA-4分子とCD44分子が同時に活性化されることはなくreciprocalにVLA-4,CD44分子が機能するよう細胞内で制御されていることが示唆された。次に、FBに対するBリンパ球の接着に関して検討を加えたところ、Bリンパ球活性化後4時間以内は主にVLA-4分子によりそれ以降はCD44分子によりBリンパ球とFBとの接着が担われていることが示唆された。また、ヒトBリンパ球も、PMA刺激によりVLA-4およびCD44分子を介してFNおよびHAに対して接着能を示し、上述の機序によりヒトBリンパ球が歯肉線維芽細胞に接着する可能性が示唆された。

为了阐明B淋巴细胞在发炎的牙周组织中定植和积累的分子机制，我们对牙龈的主要组成细胞之一的成纤维细胞（FB）以及这些细胞产生的细胞外基质（BCM）进行了研究。我们分析了B淋巴细胞的粘附能力是如何调节的。根据研究计划，首先使用小鼠正常B细胞和各种克隆B淋巴肿瘤细胞作为指示细胞。然后，我们详细检查了这些指示细胞的刺激如何影响它们对透明质酸 (HA)、纤连蛋白 (FN) 和 FB 的粘附。结果，当小鼠 B 淋巴细胞被诱导 B 淋巴细胞增殖和分化的刺激物（如 Porbol 12-肉豆蔻酸酯 13-乙酸酯 (PMA)、IL-5 和脂多糖 (LPS)）激活时，这些细胞的 FN增加并诱导对透明质酸的粘附。然而，IL-4只能诱导B细胞的初始激活，不能诱导与任何ECM的粘附。这表明B细胞的激活阶段与其粘附ECM的能力之间存在重要关系。此外，使用细胞粘附分子特异性单克隆抗体的粘附抑制实验证实，B淋巴细胞对FN和HA的粘附分别是由VLA-4和CD44分子介导的。有趣的是，VLA-4和CD44分子并不是同时激活的，这表明VLA-4和CD44分子的功能在细胞内以相互的方式调节。接下来，我们研究了B淋巴细胞与FB的粘附，发现B淋巴细胞激活后4小时内，VLA-4分子负责B淋巴细胞与FB的粘附，此后CD44分子负责B淋巴细胞之间的粘附和FB有人建议。此外，在PMA刺激下，人B淋巴细胞还通过VLA-4和CD44分子表现出对FN和HA的粘附能力，表明人B淋巴细胞可能通过上述机制粘附到牙龈成纤维细胞。