砂ネズミ海馬におけるユビキチンの免疫染色性の虚血による変化

缺血引起的沙鼠海马泛素免疫染色变化

基本信息

批准号：
05771011
负责人：
森本正
金额：
$ 0.58万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771011/
关键词：
cerebral ischemia neuronal death monoclonal antibody stress response ubiquitin immunocytochemistry

项目摘要

砂ネズミ一過性前脳虚血モデルを用いてユビキチンの免疫染色性の変化を観察し、ユビキチンと神経細胞死の関係を検討した。砂ネズミの両側総頚動脈を5分間閉塞して前脳虚血を負荷した。虚血の3、6、12、24、48時間後に動物を灌流固定し、Vibratomeにて海馬を含む50mumの切片を作成した。4種類の抗ユビキチン抗体を用いABC法により免疫染色をおこなった。使用した抗体は1)ウサギポリクローナル抗体(Sigma U-5379)2)ラットモノクローナル抗体(DF2)、3)マウスモノクローナル抗体(Chemicon)4)マウスモノクローナル抗体(Iqbal 5-25)であった。Sigma U-5379では虚血後3-6時間で海馬CA1領域の染色体が低下し回復は見られなかった。一方、DF2、Chemiconでは虚血後の海馬CA1領域の染色体の低下は軽度であり、48時間後には正常の対照と同レベルまで回復した。Iqbal 5-25 ではSigmaと同様に海馬CA1での虚血後の低下が観察された。以上の抗体による染色体の著しい違いは、抗体のユビキチンの認識様式の差異によるものと考えられた。Iqbal 5-25 が主としてconjugated form のユビキチンを認識することから、虚血の後に細胞死に先立って、ユビキチンのconjugation の障害があるものと想定された。

我们使用砂鼠瞬态前脑缺血模型观察到泛素的免疫染色性变化，并检查了泛素和神经元细胞死亡之间的关系。将砂小鼠的双侧共同颈动脉堵塞5分钟，以加载前脑缺血。灌注并固定在缺血后的3、6、12、24和48小时，并在纤维状质组中制成50个含有海马的截面。使用ABC使用四种类型的抗泛素抗体进行免疫染色。所使用的抗体是1）兔多克隆抗体（Sigma U-5379）2）大鼠单克隆抗体（DF2），3）小鼠单克隆抗体（Chemicon）4）小鼠单克隆抗体（IQBAL 5-25）。在Sigma U-5379中，缺血后3-6小时降低了海马CA1区域的染色体，未观察到恢复。另一方面，缺血后海马CA1区域DF2和Chemicon染色体降低，48小时后，将染色体恢复到与正常对照的相同水平。在IQBAL 5-25中，观察到海马CA1的缺血后减少，类似于Sigma。上述抗体引起的染色体的显着差异被认为是由于抗体的泛素识别模式的差异所致。由于IQBAL 5-25主要以共轭形式识别泛素，因此假定存在缺血之前的泛素结合症，并在细胞死亡之后发生。