遺伝子、及び固体レベルでのCキナーゼ分子種の組織特異性の解析

个体水平上 C 激酶分子种类的基因和组织特异性分析

基本信息

批准号：
05770087
负责人：
長田真一
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770087/
关键词：
プロテインキナーゼC 組織特異性精巣プロモーター領域

项目摘要

1.本研究において我々は、様々な分化段階の細胞から成る精巣をモデルにして、細胞の増殖、分化といった段階に異なったPKC分子種が関与するのではないか、という仮説の検証を試みた。まず、ノーザンブロット解析の結果、PKC分子種の中でnPKCdeltaとnPKChthetaの発現が精巣において非常に高いことが分かった。また、両分子種の精巣におけるmRNAの大きさは、他の臓器のそれに比べて小さく、精巣特異的スプライシング機構の存在が示唆された。PCR法を用いて精巣由来のnPKCdelta,thetaのcDNAをクローニングして調べたところ、両分子種共に蛋白コード領域は短くなっておらず、mRNAのサイズが小さくなっているのは、蛋白非コード領域のスプライシングによるものと考えられた。nPKCdeltaは、in situハイブリダイゼーションの結果、減数分裂後の前期精子細胞に特異的に発現が認められた。エルトリエーターで精巣の構成細胞を分画した後のノーザンブロットでも同様の結果が得られた。従って、nPKCdeltaは精巣において半数体特異的に発現していることが示唆された。一方nPKCthetaは、theta特異的抗体を用いて免疫組織染色を行ったところ、アンドロゲンを分泌する間質細胞、ライディッヒ細胞特異的に強い染色が見られた。精巣におけるステロイドホルモンの合成にPKCが関与しているという報告があり、今後ライディッヒ細胞の培養細胞を用いて、nPKCthetaとステロイドホルモンの合成の関係について調べていく予定である。2.PKC分子種の組織特異的発現機構を解析するために、これまで我々が上皮組織での発現が高いことを示してきたnPKCetaの5'上流のゲノムDNAのクローニングを試みた。その結果、5'上流のプロモーター部分を含む領域のクローニングに成功し現在解析中である。

1。在这项研究中，我们试图验证以下假设：PKC分子物种可能参与细胞的阶段和分化，以各种分化相的细胞睾丸建模。首先，由于北印迹分析，PKC分子物种中Npkcdelta和Npkchtheta的表达在睾丸中非常高。另外，与其他器官相比，存在两个分子睾丸中mRNA的大小，这表明了较小的睾丸特异性喷射机制。当使用PCR方法使用源自睾丸的NPKCDELTA的cDNA时，在两个分子种类中，蛋白质索区域都不短，mRNA的尺寸较小，即蛋白质非蛋白质被认为是由于spricing造成的。 Npkcdelta是由原位杂交特别代表的，这是由于下降减少后的第一学期细胞而导致的。在ELT护身符中的睾丸组成细胞分开后，在北部基础上获得了相似的结果。因此，有人提出npkcdelta在睾丸中特定表达。另一方面，npkctheta用硫代特异性抗体染色的免疫组织，表明一个间质细胞分泌雄激素，并专门染料特异性染料。据报道，PKC参与了睾丸中类固醇激素的合成，我们计划研究NPKCTHETA与类固醇激素合成的关系，将来使用Radich细胞培养细胞。 2。为了分析PKC分子类型的组织特异性表达，我们试图将NPKCETA上游的NPKCETA上游DNA克隆，这表明它在上皮组织中具有很高的表达。结果，目前正在分析该区域的克隆，包括上游5'的启动子部分。