ミトコンドリア型シトクロムPー450依存性オキシゲナ-ゼ系の組織特性と生理機能

线粒体细胞色素P-450依赖性加氧酶系统的组织特征和生理功能

• 批准号: 01570160
• 负责人: 三浦 成敏
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kagawa Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01570160/
• 关键词: シトクロムPー450; モノオキシゲナ-ゼ; ステロイドホルモン; コレステロ-ル側鎖切断酵素; アドレノフェレドキシン

副腎皮質ミトコンドリアよりシトクロムPー450scc,シトクロムPー450μβ、NADPHーアドレノフェレドキシン還元酵素、アドレノフェレドキシンをそれぞれ精製し、これらの免疫抗体の作成並びに酵素化学的特性を研究した。特にシトクロムPー450sccはアドレノフェレドキシンが結合することにより、このヘム酵素のヘム近傍の構造変化が著明に起こることを見出した。この結果は、シトクロムPー450sccの酵素活性機構の解析並びに基質であるコレステロ-ル結合の際、ヘム近傍に存在する基質結合部位の構造変化の解析に重要な手がかりを与える。一方、ミトコンドリア型シトクロムPー450sccはアドレノフェレドキシンと結合するが、この結合部位がどこであるかを決定した。同様のことをシトクロムPー450μβについても検討すると、極めて類似性を示す蛋白質の一次構造が認められた。副腎皮質のミクロソ-ムからはシトクロムPー450sccを精製し、酵素化学的性質を見た。加えてこの免疫抗体を作成した。上記のシトクロムPー450アイソザイムの免疫抗体は、脳におけるシトクロムPー450sccの局右部位の決定に使用し、研究を進めている。特にミエリン領域にシトクロムPー450sccの局右が認められた。神経細胞には全く免疫学的反応は認められず、シトクロムPー450sccは局右していないことが分かった。我々は脳以外のミエリン領域についても検討中である。シトクロムPー450scc以外のミトコンドリア型シトクロムPー450であるシトクロムPー450μβやこの関連酵素についても検討している。

从肾上腺皮质线粒体中纯化了细胞色素P-450SCC，细胞色素P-450μβ，NADPH-肾上腺素氧蛋白还原酶和肾上腺素氧蛋白的纯化，并研究了这些免疫抗体的制备，并研究了这些免疫抗体和酶促化学特性。特别是，发现肾上腺毒素结合会导致该血红素酶的血红素发生显着变化，以符合血红素。该结果为分析细胞色素P-450SCC的酶活性机理的分析提供了重要的线索，并分析了底物胆固醇结合后，位于血红素附近的底物结合位点的结构变化。另一方面，线粒体细胞色素p-450scc与肾上腺素氧蛋白结合，并确定该结合位点在哪里。当研究细胞色素P-450μβ时，观察到表现极其相似性的蛋白质的主要结构。从肾上腺皮质的微粒体纯化细胞色素P-450SCC，观察到酶化学。此外，制备了该免疫抗体。上述细胞色素P-450同工酶的免疫抗体用于确定大脑中细胞色素P-450SCC的局部右侧位置，目前正在研究中。特别是在髓磷脂区域发现了细胞色素P-450SCC。在神经元中没有观察到免疫学反应，发现细胞色素P-450SCC并非局部正确。我们还在考虑大脑以外的其他髓鞘区域。我们还考虑了细胞色素P-450μβ，即除细胞色素P-450SCC以外的线粒体细胞色素P-450，这是相关的酶。

项目成果

Tsubaki,M.,Hiwatashi,A.and Ichikawa,Y.: "Conformational change of the heme moiety of ferrous cytochrome Pー450sccーphenylisocyanide complex upon binding of reducedadrenodoxin." Biochemistry. 28. 9777-9784 (1989)

Tsubaki, M.、Hiwatashi, A. 和 Ichikawa, Y.：“亚铁细胞色素 P-450scc-苯基异氰化物复合物的血红素部分在还原肾上腺素结合后的构象变化。” 28. 9777-9784 (1989)。

Hamamoto,I.,Tanaka,T.,Maeba,T.,Chikaishi,K.and Ichikawa,Y.: "Microsomal cytochrome Pー450ーlinked monooxygenase systems and lipid composition of human hepatocellular carcinoma." Br.J.Cancer. 59. 6-11 (1989)

Hamamoto, I.、Tanaka, T.、Maeba, T.、Chikaishi, K. 和 Ichikawa, Y.：“微粒体细胞色素 P-450 连接的单加氧酶系统和人肝细胞癌的脂质组成。” 59. 6-11 (1989)

Hamamoto,I.,Kurokohchi,K.,Tanaka,S.and Ichikawa,Y.: "Adrenoferredoxinーbinding peptide of NADOHーadrenoferredoxin reductase." Biochem.Biophys.Acta. 953. 207-213 (1988)

Hamamoto, I.、Kurokohchi, K.、Tanaka, S. 和 Ichikawa, Y.：“NADOH-肾上腺铁氧还蛋白还原酶的肾上腺铁氧还蛋白结合肽。” 953. 207-213 (1988)

Tsubaki,M.,Hiwatashi,A.,Ichikawa,Y.,Fujimoto,Y.,Ikekawa,N.and Hori,H.: "Electron parmagnetic resonance study of ferrous cytochrome Pー450sccーnitric oxide complexes:effects of 20(R),22(R)ーdihydroxyーcholesterol and reduced adrenodoxin." Biochemistry. 27. 485

Tsubaki, M.、Hiwatashi, A.、Ichikawa, Y.、Fujimoto, Y.、Ikekawa, N. 和 Hori, H.：“亚铁细胞色素 P-450scc-一氧化氮复合物的电子顺磁共振研究：20（的影响） R),22(R)-二羟基胆固醇和还原肾上腺素。”生物化学。27. 485

Sakihama,N.,Hiwatashi,A.,Miyatake,A.,Shin,M.and Ichikawa,Y.: "Isolation and purification of mature bovine adrenocortical ferredoxin with an elogated carboxyl end." Arch.Biochem.Biophys.264. 23-29 (1988)

Sakihama,N.、Hiwatashi,A.、Miyatake,A.、Shin,M. 和 Ichikawa,Y.：“具有延长的羧基末端的成熟牛肾上腺皮质铁氧还蛋白的分离和纯化。”