ル-メンプロトゾアおよびル-メンバクテリアのリジン合成酵素の比較生化学的研究

瘤胃原虫和瘤胃细菌赖氨酸合酶生化比较研究

基本信息

批准号：
01560311
负责人：
小野寺良次
金额：
$ 1.09万
依托单位：
University of Miyazaki
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

平成元年度の研究計画に沿って、混合ル-メンプロトゾア(RP)および混合ル-メンバクテリア(RB)のジアミノピメリン酸脱炭酸酵素(DDC)-リジン合成酵素-活性を検討し、以下の結果が得られたので、報告する。ヘイキュ-ブと濃厚飼料(3:1)を給与している山羊のル-メン内容物からRPおよひRBを集め、超音波により細胞を破壊して、その遠心分離上清液を粗酵素液として用い、DDCの性質を両者間で比較した。DDC活性の測定には、他の微生物による研究に倣って、ピリドキサルリン酸(PLP,0.1mM)を添加し、また、基質としてジアミノピメリン酸(DAP)を3mMとなるように添加した。まず、遠心分離分画の酵素活性をみると、RPでは上清液のみならず沈澱画分にもかなりの活性がみられ、細胞内では、PRのDDCは膜または細胞内顆粒に結合しているものと考えられた。これに対して、RBでは上清中にほとんどの活性が現れた。また、DDCは、RPおよびRBともに酸素に弱く、還元剤の添加で復活する傾向があったので、DDC活性の測定には0.1%2-メルカプトエタノ-ルを常に添加することにした。次に、最適pHを検討した結果、RPでは6.3、RBではE.coliに近い6.8であった。最適温度は、RPで50℃付近、RBで45℃付近であった。いずれもル-メン内温度よりもかなり高い値であった。基質親和性の検討結果では、Km値は、RPで0.976mM、RBで1.119mMとなり、RPの方がやや親和性が高いと考えられた。次に、RPの膜結合酵素の可溶化を検討し、0.5%Triton X-100により可溶化されることが分かった。最後にRPについてのみ、ゲル濾過法(Sephadex G-100)によるDDCの分子量の推定を行なった結果、約170,000という値が得られた。これは、E.coliのそれに近い値であった。以上の結果から、RPのDDCの性質は、RBのそれとは全く異なることが分かり、これはRP固有の酵素と考えられた。

按照1989年的研究计划，我们对混合瘤胃原生动物（RP）和混合瘤胃细菌（RB）的二氨基庚二酸脱羧酶（DDC）-赖氨酸合酶活性进行了研究，得到了以下结果，所以我。会举报的从饲喂干草块和精料饲料（3:1）的山羊瘤胃内容物中收集RP和RB，用超声波破碎细胞，用离心上清液提取粗酶，比较两者的DDC特性。。为了测量 DDC 活性，在使用其他微生物进行研究后，添加了磷酸吡哆醛（PLP，0.1 mM），并添加二氨基庚二酸（DAP）作为底物至 3 mM。首先，观察离心部分中的酶活性，我们发现在 RP 中，不仅在上清液中而且在沉淀部分中都观察到相当大的活性，并且在细胞内，PR 的 DDC 与膜或细胞内颗粒结合。人们认为有。相反，对于 RB，大部分活性出现在上清液中。此外，DDC的RP和RB都对氧敏感，并且往往通过添加还原剂而复活，因此我们决定始终添加0.1%的2-巯基乙醇来测量DDC活性。接下来，我们检查了最佳 pH，RP 为 6.3，RB 为 6.8，与大肠杆菌接近。 RP 的最佳温度约为 50°C，RB 的最佳温度约为 45°C。两个值均显着高于瘤胃内部温度。底物亲和力研究的结果是，RP的Km值为0.976mM，RB的Km值为1.119mM，表明RP具有稍高的亲和力。接下来，我们研究了RP膜结合酶的溶解情况，发现它被0.5% Triton X-100溶解。最后，仅对于RP，通过凝胶过滤法(Sephadex G-100)估算DDC的分子量，得到约170,000的值。该值与大肠杆菌的值接近。由以上结果发现，RP中DDC的性质与RB中完全不同，这被认为是RP特有的酶。