Development of A Novel Disease Model for Hypertensive Disorders of Pregnancy Using Menstrual-Blood-Derived Cells from Patients

利用患者经血来源的细胞开发妊娠期高血压疾病的新疾病模型

• 批准号: 22KJ2784
• 负责人: 細谷 聡史
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2784/
• 关键词: 月経血; 間葉系幹細胞; 3次元培養; 脱落膜化; 子宮内膜上皮細胞; 子宮内膜間質細胞

初年度に我々は患者由来のMenSCsの初代培養系の確立とその細胞特性解析を行った。主に不妊外来に通院中である不妊症患者から外来での内診時に月経血を採取し初代培養を行った。対象となった16症例のうち10例で紡錘形の間葉系細胞の初代培養に成功した。採取された細胞において間葉系幹細胞の特徴であるプラスチック培養皿への生着性・増殖性を有すること、脂肪・骨・軟骨への分化能を有すること、またFlow cytometryにより間葉系幹細胞に特徴的である表面マーカーのCD73, CD90, CD105が陽性であることを確認した。以上より我々は月経血間葉系幹細胞の初代培養系を確立することができた。次に我々はコラーゲン基質を用いた子宮内膜の3次元培養法の検証を行った。具体的には1×10^6個の子宮内膜間質細胞をコラーゲンゲルとともに1週間培養し子宮内膜間質シートを作成したのち、1×10^6個の子宮内膜上皮細胞をシート上に播種しさらに1週間培養した。本手法で作成したシートは組織学的に子宮内膜様構造を有し、またエストロゲン、プロゲステロン、cAMPの添加により脱落膜化(ホルモン反応性)に関わる因子(PRL、IGFBP-1)のmRNA発現の上昇をqRT-PCRで確認した。以上より我々は子宮内膜の3次元培養法の基盤技術を確立することができた。以上の通りこれまでの研究の進捗状況は順調である。今年度は患者由来月経血間葉系幹細胞のパラクリン能を評価するとともに、3次元子宮内膜シートと絨毛細胞との共培養系の確立を検証する予定である。

在第一年，我们建立了患者衍生的MENSC的主要培养系统，并分析了它们的细胞表征。从主要访问不育门诊诊所并经过原发性培养的不孕症患者的门诊内部检查期间收集了月经血液。在这16名受试者中，有10例成功培养的纺锤形间充质细胞。确认收集的细胞具有植入和增殖成间质干细胞特征的塑料培养皿的能力，可分化为脂肪，骨骼和软骨，并确认表面标记CD73，CD90和CD105，这些标记是中质干细胞的特征，是流式细胞仪的阳性。从上面，我们能够建立一种用于月经间充质干细胞的原发性培养系统。接下来，我们使用胶原蛋白底物研究了一种子宫内膜的3D培养方法。具体而言，将1×10^6的子宫内膜基质细胞与胶原蛋白凝胶一起培养一周，以制备子宫内膜基质片，然后将1×10^6子宫内膜上皮细胞播种在薄片上并培养再培养一周。使用这种方法制备的床单具有组织学子宫内膜样结构，QRT-PCR证实，通过添加雌激素，孕酮和cAMP来增加涉及二键化（PRL，IGFBP-1）因子（PRL，IGFBP-1）的mRNA表达（PRL，IGFBP-1）。从以上，我们能够为子宫内膜的3D培养方法建立基本技术。如上所述，到目前为止的研究进展一直进展顺利。今年，我们计划评估患者衍生的月经间充质干细胞的旁分泌潜力，并验证三维子宫内膜片和绒毛细胞之间建立共培养系统。