熱傷創部の植皮術に適した３次元培養皮膚作成における脂肪由来間葉系幹細胞の機能解析

脂肪间充质干细胞在制作适合烧伤创面植皮的三维培养皮肤中的功能分析

• 批准号: 16K11408
• 负责人: 小網 博之
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Saga University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-01 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16K11408/
• 关键词: 間葉系幹細胞; ３次元皮膚培養; 線維芽細胞; 血管内皮細胞; ケラチノサイト; スフェロイド; HA matrix; 皮膚パッチ; 3次元皮膚培養; 脂肪由来間葉系幹細胞; HA-Matrix; 3次元培養; 3次元培養皮膚; 組織体形成装置; 皮膚移植

我々は、これまでにも各細胞腫を用いた細胞凝集塊（スフェロイド）形成を基本単位とした3次元皮膚培養を行い、熱傷創部に移植するのに耐えうる皮膚パッチ作成を試みた。本研究では、近年注目されてきた脂肪由来間葉系幹細胞に注目し、従来の皮膚パッチに加えることによる皮膚パッチの構造変化や機能の変化などを解析することを目的とした。線維芽細胞や血管内皮細胞、ケラチノサイトと同様に、間葉系幹細胞も単培養を繰り返し、スフェロイドを作成する。そして、毎回、組み合わせやその比率を変えることにより作成される皮膚パッチの構造を肉眼観察ならびに光学顕微鏡による観察でそれぞれ評価し、その直径の推移や形態の変化を数日間に渡り記録した。研究期間内に10種類の異なる皮膚パッチをそれぞれ作成することに成功した。また、一部の検体については、血管内皮細胞に特異的なCD31やCD34に対する免疫染色も行いその構造を観察した。また、この研究期間内に、HA-matrixという細胞外マトリックスを豊富に含むノロゲンゲ抽出物を、スフェロイド作成に用い、スフェロイド作成への効果を合わせて評価した。特に濃度と作成されるスフェロイド系の相関や作成行程における影響なども考察し、よりスムーズなスフェロイド作成に対するHA-matrixの有用性も評価した。研究全体としては、異動に伴う研究期間の途中終了もあったが、残念ながら植皮に耐えうる皮膚パッチを作成することができず、後半の動物を使った植皮実験までは進めることができなかった。

我们以前使用每个细胞瘤使用细胞聚集（球体）进行了3D皮肤培养，并试图创建可以承受植入烧伤伤口的皮肤斑块。这项研究的重点是脂肪来源的间充质干细胞，近年来吸引了人们的注意，并旨在分析由于将其添加到常规的皮肤斑块中引起的皮肤斑块的结构和功能变化的变化。就像成纤维细胞，内皮细胞和角质形成细胞一样，间充质干细胞也反复单培养以产生球体。每次，通过视觉观察和光学显微镜都评估了通过改变组合和比率产生的皮肤斑块的结构，并且在几天内记录了直径和形态的变化。在研究期间，我们能够创建10种不同的皮肤斑块。此外，对一些特定于血管内皮细胞的CD31和CD34进行了免疫染色，并观察到它们的结构。此外，在本研究期间，使用富含细胞外基质的北果烯提取物用于制备球体，并与球体产生的效果一起评估。特别是，我们还研究了浓度与正在创建的球体系统与创建过程的影响之间的相关性，并评估了Ha-Matrix对球体的更平滑创建的有用性。总体而言，由于转移的转移，研究期在研究的中间完成，但不幸的是，我们无法创建可以承受皮肤移植物的皮肤贴片，并且我们无法在下半场使用动物进行皮肤移植实验。