Naive型ウサギ多能性幹細胞の樹立と胚盤胞補完法による膵臓再生への利用

囊胚互补法建立幼稚兔多能干细胞并用于胰腺再生

• 批准号: 22KJ1490
• 负责人: 岩月(中山) 研祐
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The University of Tokyo (2023)Shinshu University (2021-2022)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ1490/
• 关键词: 多能性幹細胞; エピゲノム

当該年度は昨年度に引き続き、当初予定していた研究課題を転換及び発展させ、ラットを用いて多能性幹細胞における普遍的な未分化維持機構の解明、及び各発生段階を反映した新規幹細胞の樹立に取り組んだ。特に、着床後のエピブラストの多能性を反映した Primed 型のエピブラスト幹細胞は、これまで分化した細胞が混在した不均一な状態での培養が一般的であり、樹立や維持は非効率であった。そこでまず、ラットエピブラスト幹細胞 (rEpiSC) を安定に樹立・維持可能な培養条件を検討したところ、Rho/ROCK シグナルの恒常的な阻害と WNT シグナルの強力な阻害により、分化細胞の出現を抑えて均一な未分化性を示す rEpiSC の樹立に成功し、rEpiSC を安定に樹立・維持できる新規の培養系として確立した。そこで次に、この培養系を用いて培養された rEpiSC がどの発生段階を反映しているのかを評価した。その結果、rEpiSC を着床前の胚盤胞に移植して発生を進めても移植した細胞は生着せず、胎仔のキメラ形成は確認できなかったが、免疫不全マウスの精巣に移植すると、外胚葉・中胚葉・内胚葉のそれぞれに特徴的な組織構造を持つテラトーマの形成が確認できた。さらに、rEpiSC から胚葉体を形成させ BMP で刺激すると、始原生殖細胞様細胞を分化誘導でき、誘導された始原生殖細胞様細胞を生殖細胞を欠損するラット新生仔精巣に移植すると精子形成可能で、得られた精子細胞はラット未受精卵への顕微授精により産仔作出が可能であることが明らかとなった。このように、新規の培養系で維持された rEpiSC は三胚葉への分化誘導だけでなく生殖細胞への分化誘導も可能であったことから、三胚葉及び生殖細胞への運命決定が始まる原腸陥入前の発生段階を反映していることが示唆された (岩月ら、第45回日本分子生物学会、2022年)。

在这个财政年度，我们继续改变并开发最初计划的研究主题，并致力于使用大鼠使用大鼠阐明多能干细胞中普遍的未分化的维持机制，并建立反映每个发育阶段的新型干细胞。特别是，反映植入后多能性多能性的灌木型培养基细胞通常在混合分化细胞的异质状态中培养，并且在建立和维持方面效率低下。首先，我们研究了可以稳定建立和维持大鼠纤维细胞干细胞（repiscs）的培养条件。通过对Rho/Rock信号的构型抑制和对Wnt信号的强大抑制，我们成功地建立了雷神，通过抑制分化细胞的出现，表现出均匀的不分化，并成为可以稳定建立和维持重新恢复的新型培养系统。因此，我们接下来评估了使用这种培养系统反映的培养的重新散发的发展阶段。结果，即使在植入和发育进发之前将重新浸泡植入胚泡，植入细胞也没有植入，并且无法确认胎儿中的嵌合体，但是当将植入免疫缺陷的小鼠的遗传植入术中时，用独特的组织结构形成了各种组织结构。 Furthermore, when the germ cells are formed from rEpiSCs and stimulated with BMP, the primordial germ-like cells can be differentiated, and when the induced primordial germ-like cells are implanted into the neonatal testis of rats that lack germ-cells, it has been revealed that sperm-forming can be produced by intravenous insemination of the resulting sperm cells into the rat unfertilized eggs.因此，在新型培养系统中维持的重新散发能够诱导触发器和生殖细胞的分化，这表明它们反映了胃裂解前的发育阶段，在这种情况下，触发物和生殖细胞的命运确定开始（Iwatsuki等人，第45届分子生物学学会，2022年）。

项目成果

ラット Naive 型多能性幹細胞におけるゲノムインプリンティング消去回避の試み

尝试避免大鼠幼稚多能干细胞中基因组印记的擦除

• 发表时间: 2021
• 作者: 岡本恭弥;顧淳祉;張潮;山本雅道・小田悠介・市川雄貴・宮原裕一・笠原里恵;市川雄貴・宮原裕一;市川雄貴・宮原雄一;岩月研祐;岩月研祐
• 通讯作者: 岩月研祐

ラットエピブラスト幹細胞を安定に樹立・維持可能な培養条件の確立

建立能够稳定建立和维持大鼠外胚层干细胞的培养条件

• 发表时间: 2022
• 作者: 岡本恭弥;顧淳祉;張潮;山本雅道・小田悠介・市川雄貴・宮原裕一・笠原里恵;市川雄貴・宮原裕一;市川雄貴・宮原雄一;岩月研祐
• 通讯作者: 岩月研祐