新規がん抑制遺伝子の機能解析から解き明かすテロメレース発現制御ネットワーク

通过新型肿瘤抑制基因的功能分析揭示端粒酶表达调控网络

• 批准号: 13J06643
• 负责人: 大平 崇人
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J06643/
• 关键词: テロメレース; メラノーマ; microRNA; がん; がん抑制遺伝子; TERT; PITX1

申請者らは, ヒトテロメレース逆転写酵素遺伝子hTERTの内在性の抑制遺伝子としてPITX1を同定した. さらに, 昨年度までの研究成果より, PITX1に結合し複合体を形成する新規のX遺伝子の発見と, さらにPITX1の発現を負に制御する新規microRNA(miRNA)としてmiR-19bを同定した.本年度は①PIXT1-X遺伝子複合体の詳細な機能解析と②ES細胞におけるPITX1の発現動態解析および③miR-19bによるPITX1抑制効果とメラノーマ発生との関連性について検討を行った.　その結果, 実験①からは, PITX1とX遺伝子を一過性に共発現させたヒトメラノーマ細胞株A2058において, PITX1単独の発現実験と比べて, さらに高いTERTの抑制効果が認めた. また, 実験②では未分化細胞(ES・iPS細胞)を神経細胞へと分化させて, その過程におけるhTERTとPITX1の発現動態解析を行ったところ, 未分化状態のES・iPS細胞ではhTERTの発現は高く, PITX1の発現はほとんど認められた. 一方, 神経分化誘導細胞においてはhTERTの発現低下とPITX1の顕著な発現上昇が確認された. 加えて, 実験③からPITX1の発現を制御するmicroRNAとしてmiR-19bを同定した. メラノーマ細胞株A2058におけるmiR-19bのノックダウンはPITX1の発現上昇を誘導し、さらにhTERT抑制効果が認められた(Ohira T et al, Scientific Reports : online, DOI:10.1038/srep08201, 2015).以上の結果から, hTERTの発現を正に制御するmiR-19bと負に制御するPIXT1-X遺伝子複合体の存在を同定し, 新たなテロメレース制御の分子経路の存在を明らかにした.

申请人将PITX1鉴定为人端粒酶逆转录酶基因HTERT的内源性抑制基因。此外，从研究结果到去年，我们发现了一个新颖的X基因，该基因与PITX1结合并形成复杂，并且还将miR-19b鉴定为一种新型microRNA（miRNA），对PITX1的表达进行负调节。今年，我们研究了1）PIXT1-X基因复合物的详细功能分析，2）ES细胞中PITX1的表达动力学的分析，以及3）MiR-19b抑制PITX1和黑色素瘤产生的miR-19b之间的关联。结果，与单独的PITX1的表达实验相比，在人类黑色素瘤细胞系A2058中，在人类黑色素瘤细胞系A2058中，该细胞系A2058暂时表达了PITX1和X基因。在实验2中，将未分化的细胞（ES和IPS细胞）分化为神经元，并在此过程中分析了HTERT和PITX1的动力学。在未分化状态下的ES和IPS细胞中HTERT表达较高，并且几乎观察到PITX1表达。另一方面，在诱导神经分化的细胞中证实了HTERT表达的降低和PITX1表达的显着增加。此外，miR-19b被确定为调节PITX1表达的microRNA。黑色素瘤细胞系A2058中miR-19b的敲低诱导了PITX1的表达，并且也观察到了抑制HTERT的效果（Ohira T等人，科学报告：在线，DOI，DOI：10.1038/srep08201，2015）。从这些结果中，我们确定了miR-19b的存在，miR-19b积极调节了HTERT表达和PIXT1-X基因复合物，这些基因复合物对端粒酶调节的新分子途径产生负调节，并揭示了存在。

项目成果

染色体工学技術によるテロメレース抑制遺伝子の単離

利用染色体工程技术分离端粒酶抑制基因

• 发表时间: 2014
• 作者: Osaki M;Chinen H;Ybshida Y;Ohhira T;Sunamura N;Yamamoto O;Ito H;Oshimura M;Kugoh H.;大沼進・長坂邦仁・佐藤浩輔・北梶陽子・吉田悠一郎;渡辺周;小西信義・安達聖・大宮哲・佐藤浩輔・村上智彦;大平 崇人;渡辺周;大平 崇人
• 通讯作者: 大平 崇人

miR-19B regulates hTERT expression through targeting PITX1 in melanoma cells

miR-19B 通过靶向黑色素瘤细胞中的 PITX1 调节 hTERT 表达

• 发表时间: 2014
• 作者: Osaki M;Chinen H;Ybshida Y;Ohhira T;Sunamura N;Yamamoto O;Ito H;Oshimura M;Kugoh H.;大沼進・長坂邦仁・佐藤浩輔・北梶陽子・吉田悠一郎;渡辺周;小西信義・安達聖・大宮哲・佐藤浩輔・村上智彦;大平 崇人
• 通讯作者: 大平 崇人