オートファジー・アミノ酸代謝に基づいた難治性白血病の病態解明と治療応用

难治性白血病病理学的阐明及基于自噬和氨基酸代谢的治疗应用

基本信息

批准号：
22KJ3215
负责人：
山嵜博未
金额：
$ 3.08万
依托单位：
Foundation for Biomedical Research and Innovation at Kobe
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ3215/
关键词：
アミノ酸トランスポーター LAT1 SLC7A5 急性骨髄性白血病

项目摘要

本申請では、急性骨髄性白血病（AML）においてアミノ酸マスター因子である転写因子ATF4がアミノ酸合成系の活性化の両方を促進することで病態発症・進展に寄与するかを明らかにすることを目的とし、研究を開始した。ヒト白血病細胞株（K562、MOLM13、TF-1）およびマウス白血病細胞株（RN2、BaF/3）にCas9を発現させた細胞に対して、sgATF4発現ベクターを導入し、ATF4欠失細胞が野生型細胞との競合的培養条件において経時的に減少することを明らかにした。ATF4欠失細胞は、G1/S遷移の遅延/停止を伴う低下を示した。近年、ATF4は正常造血にも寄与し、造血幹細胞の機能維持を担うことが報告されており（Sun et al., Science Advances 2021）、急性骨髄性白血病の治療標的としてはATF4の下流を探索することが不可欠だと考えた。そこで、白血病細胞株を用いたCRISPRスクリーニングの報告をもとに（Shi et al., Science Advances 2021）、白血病の生存・増殖に重要なはたらきを示すATF4の標的遺伝子を探索した。複数の候補遺伝子のsgRNA発現ベクターを作成し、それぞれ白血病細胞株に導入した。その結果、特に分岐鎖アミノ酸トランスポーターSLC7A5および葉酸合成酵素MTHFD1に対するsgRNAを導入した白血病細胞が競合的培養条件で減少することを明らかにした。

该应用已经开始研究，目的是阐明转录因子ATF4是否通过促进急性髓样白血病（AML）的氨基酸合成系统的激活来促进病理的发展和发展。将SGATF4表达载体引入了在人白血病细胞系（K562，MOLM13，TF-1）和小鼠白血病细胞系（RN2，BAF/3）中表达CAS9的细胞，并揭示ATF4缺陷型细胞在与野生型细胞的竞争性培养条件下随着时间的流逝降低了随着时间的流逝。 ATF4缺陷型细胞显示延迟/停止的G1/S转变降低。近年来，据报道，ATF4有助于正常的造血剂，并维持造血干细胞的功能（Sun等，Science，Science 2021），并且人们认为ATF4下游搜索ATF4是必不可少的急性骨髓性白血病的治疗靶标。因此，基于使用白血病细胞系CRISPR筛查的报告（Shi等，Science Prosping 2021），我们搜索了ATF4的靶基因，该基因在白血病的存活和增殖中表现出重要作用。制备了多个候选基因的SGRNA表达载体，并将每个载体引入白血病细胞系。结果表明，在竞争性培养条件下，已针对分支链氨基酸转运蛋白SLC7A5和叶酸合酶MTHFD1引入SGRNA的白血病细胞尤其降低。