鎖交換反応を介したDNA損傷トレランス機構の解析

链交换反应介导的DNA损伤耐受机制分析

基本信息

批准号：
22KJ3157
负责人：
松尾(楠本) 理加
金额：
$ 2.58万
依托单位：
National Cancer Center Japan
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ3157/
关键词：
UV 不死化ゲノム不安定性 DNA二本鎖切断紫外線

项目摘要

紫外線C波（UV-C）が細胞の不死化に与える影響を明らかにすることを目的としている。マウス胎仔線維芽細胞(MEF)は分裂を繰り返すとそのほとんどは分裂を停止するが、一部はゲノム不安定性とARF/p53変異を伴ってやがて不死化する（ここでは自然不死化と呼ぶ）。不死化の過程ではDNA複製に起因したDNA二本鎖切断が蓄積している。前年度は継代回数3回のprimary MEFにUV-Cを照射すると、非照射細胞に比べて不死化が早まることと、UV-C照射後にもDNA複製に起因したDNA二本鎖切断が蓄積していることを示した。今年度はUV-C照射後の不死化メカニズムを明らかにするために、UV-C照射後に不死化したMEF、自然不死化したMEF、primary MEFの3種類の全ゲノム配列解析を実施した。現在詳細な解析を行なっている。また、当グループではγ線により誘導されるDNA切断やヘテロクロマチン生成を指標に、これらを抑える効果の高い低分子化合物をスクリーニングにより同定し、その混合物をゲノムスタビライザーとして用いている。ゲノムスタビライザーを含む培地でMEFを培養すると、MEFの自然不死化を抑制することを示している。そこで、UV-C照射による不死化へ与える影響も調べたところ、ゲノムスタビライザーはUV-C照射後の不死化を抑制した。ゲノムスタビライザーがUV-C照射後に蓄積するDNA二本鎖切断を抑制するかどうかを現在調べている。

目的是阐明UV C波（UV-C）对细胞永生化的影响。小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）在分裂时大部分停止，但有些人最终会因基因组不稳定性和ARF/p53突变而永生（在这里我们称它们为自然永生化）。在永生过程中，由于DNA复制而发生DNA双链断裂。在上一年，具有三个带有UV-C的原代MEF的辐照表明，永生速度比非辐照细胞的辐射快，而DNA双链断裂引起的DNA复制引起的DNA双链断裂也会在UV-C辐照后积累。今年，为了阐明UV-C辐射后永生化的机制，我们进行了三种类型的整个基因组序列分析：UV-C辐照后永生的MEF，自然永生的MEF和原发性MEF。我们目前正在进行详细的分析。此外，我们的小组使用伽马射线和异染色质产生诱导的DNA裂解作为指示剂，并且筛选鉴定了在抑制这些化合物方面具有很高有效性的小分子化合物，并将混合物用作基因组稳定剂。在含有基因组稳定剂的培养基中培养MEF已证明可以抑制MEF的自然永生化。因此，我们还研究了UV-C辐射对永生的影响，并发现基因组稳定器抑制了UV-C辐射后的永生。我们目前正在研究基因组稳定剂是否抑制UV-C辐照后积累的DNA双链断裂。