染色体分配装置の再構成

染色体分离装置的重建

基本信息

批准号：
15KT0077
负责人：
五島剛太
金额：
$ 11.56万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-07-10 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

キネシン８は真核生物において保存されたモータータンパク質で、動原体微小管先端に局在し動原体微小管の長さ制御および染色体整列に重要な働きをする。しかし、このタンパク質によってどのように染色体整列が制御されるかについての詳細な機構はよく分かっていない。生化学的活性についても定まっていなかった。例えばヒトのキネシン８は微小管脱重合活性があるとする報告と、微小管伸縮を抑制するという報告がある。本研究では前年度までに、ショウジョウバエにひとつだけ存在するキネシン８の生化学的活性を決定した。すなわち、キネシン８タンパク質全長を精製し、試験管内において伸び縮みする動的な微小管と反応させると、微小管の伸長から短縮に移行する「カタストロフ」と呼ばれる現象の頻度が上昇し、微小管の長さを制限した。さらに精製したキネシン８は微小管の短縮速度を減少させ、伸長、短縮いずれも起こらない、「ポーズ」と呼ばれる現象や、短縮から伸長に移行する「レスキュー」と呼ばれる現象の頻度を上昇させた。今年度は、これらの活性がキネシン８の動原体機能にどう関与するかを明らかにすることを目指した。ショウジョウバエS2細胞においてキネシン８を欠損させると異常に長い動原体微小管が観察されるが、S2細胞においてキネシン８を欠損させ、さらに微小管重合阻害剤であるコルセミドを加え微小管の長さを制限したが、染色体整列異常の表現型をレスキューできなかった。このことから、キネシン８のカタストロフを促進する以外の機能も染色体整列に重要なことが示唆された。そこで、ショウジョウバエS2細胞においてキネシン８を欠損させ、動原体-微小管の結合を詳細に観察することにした。研究は順調に進んだが、重複制限により、本研究課題は廃止となった。

驱动蛋白8是一种在真核生物中保守的运动蛋白，位于丝粒微管的尖端，在丝粒微管和染色体比对的长度控制中起重要作用。但是，尚不清楚该蛋白如何调节染色体比对的详细机制。也没有确定生化活性。例如，有报道称，人动力蛋白8具有微管解聚活性，并且它抑制了微管的扩张和收缩。在这项研究中，前一年确定了果蝇中仅存在的驱动蛋白8的生化活性。也就是说，当纯化驱动蛋白8蛋白的整个长度与在试管中伸展和收缩的动态微管反应时，称为“灾难”的现象的频率从微管转变为缩短，增加，微管的长度是限制的。此外，纯化的驱动蛋白8降低了微管缩短的速率，增加了在伸长或缩短或缩短中都不发生的现象频率，并增加了从简化到伸长延伸的过渡。今年，我们旨在澄清这些活动如何参与驱动蛋白8的动力学功能。当驱动蛋白8缺乏果蝇S2细胞中时，观察到异常长的丝状微管，但是驱动蛋白8在S2中有缺陷，但是S2细胞中有缺陷，而微管抑制剂抑制剂的时间限制了MIRIST型的均值，但限制了MISTROUTE的均经均经没有救出染色体对齐。这表明，促进驱动蛋白8的灾难以外的功能对于染色体比对也很重要。因此，驱动蛋白8在果蝇S2细胞中缺乏，并且详细观察到了丝粒微管的结合。该研究取得了顺利的进展，但是由于重复的限制，该研究主题被废除了。