口腔扁平上皮癌治療に向けた新規核酸医薬品の開発

治疗口腔鳞癌的新型核酸药物的开发

基本信息

批准号：
16K20583
负责人：
秋山仁志
金额：
$ 2.5万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-01 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16K20583/
关键词：
アンチセンス BNA トランスフェクション miRNA in vitro in vivo 癌核酸

项目摘要

ヒト口腔扁平上皮癌細胞株である GFP-SAS 細胞に対して研究協力者の株式会社 BNA に miR-361-3p に対する BNANC を含むオリゴヌクレオチドの設計合成を依頼し、腫瘍抑制効果を示すオリゴヌクレオチドの最適な塩基数および修飾核酸である BNANC のオリゴヌクレオチド中の位置ならびに導入数について in vitro 試験で決定した。また、同時に細胞毒性を認めないコントロールアンチセンスオリゴヌクレオチドを合成した。GFP-SAS 細胞を用いた in vitro 試験で最適化した後、同社に対して in vivo 試験用にアンチセンスオリゴヌクレオチドとそのコントロールミスマッチオリゴヌクレオチドの合成を依頼した。また、これまでの in vitro 試験は核酸導入試薬である Lipofectamine RNAiMAX を用いたリバーストランスフェクションを行っていたが、オリゴヌクレオチド単剤でのアンチセンス効果を目的として BNANC の窒素部位に種々の修飾を加えたオリゴヌクレオチドを合成し、核酸導入試薬を用いない核酸導入試験を行った。これまでに 5 種類の官能基を BNANC の側鎖に導入したオリゴヌクレオチドが合成され、そのうちの１種類については in vitro 試験において最大で 20% 程度の細胞増殖抑制効果を得ている。現在、オリゴヌクレオチド単剤でさらなる細胞増殖抑制効果を示す修飾を見出すために新たな官能基やペプチドを修飾したオリゴヌクレオチドの設計および合成を進めている。また、当科において初代培養に成功している口腔扁平上皮癌患者由来の原発巣についても Lipofectamine RNAiMAX を用いた in vitro 試験を行っており、GFP-SAS 細胞を用いた時と同様に高い細胞増殖抑制効果を示した。これらの結果より複数の口腔癌由来細胞に対してアンチセンス効果を発揮するオリゴヌクレオチドの合成に成功したと考えている。

我们要求我们的研究合作者BNA Co., Ltd.为人类口腔鳞状细胞癌细胞系GFP-SAS细胞设计并合成含有针对miR-361-3p的BNANC的寡核苷酸，并发现使用了具有肿瘤抑制作用的寡核苷酸。通过体外测试确定了最佳的碱基数量、寡核苷酸中修饰的核酸BNANC的位置以及引入的数量。同时，合成了无细胞毒性的对照反义寡核苷酸。通过使用GFP-SAS细胞进行体外测试优化后，我们要求该公司合成反义寡核苷酸及其对照错配寡核苷酸用于体内测试。此外，之前的体外研究涉及使用核酸转染试剂Lipofectamine RNAiMAX进行反向转染，但为了用单个寡核苷酸实现反义效果，我们对BNANC的氮位点进行了各种修饰，并进行了反义转染。不使用核酸转移试剂的核酸转移测试。迄今为止，已经合成了BNANC侧链上引入五种功能基团的寡核苷酸，其中一种寡核苷酸在体外试验中显示出最大约20%的细胞增殖抑制作用。目前，我们正在设计和合成用新的官能团和肽修饰的寡核苷酸，以找到在单一寡核苷酸中表现出进一步的细胞增殖抑制作用的修饰。此外，我们正在使用Lipofectamine RNAiMAX对口腔鳞状细胞癌患者的原发性肿瘤进行体外试验，并已在我们科室成功进行了原代培养，显示出抑制效果。基于这些结果，我们相信我们已经成功合成了对多种口腔癌衍生细胞表现出反义作用的寡核苷酸。