炎症下の脂質メディエーター(Resolvin D2)代謝と臨床経過への影響

炎症下脂质介质（Resolvin D2）代谢及其对临床病程的影响

• 批准号: 16K20398
• 负责人: 井上 孝隆
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Kyorin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-01 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16K20398/
• 关键词: 脂質; 栄養学

【目的】Resolvin D2 (RvD2)の投与にて、侵襲後の二次的臓器障害を予防し治療成績が改善される等、様々な動物実験の報告がなされている。RvD2はDocosahexaenoic acid (DHA)の代謝産物であるが、近年のある重症外傷患者を対象とした研究結果によると、予後不良群においてDHAからRvD2への代謝経路が抑制されていたとの報告がなされ、炎症下ではDHAから効果的にRvD2へ代謝されていない可能性が示唆された。そこで今回申請者は、熱傷・外傷後のICU入室患者において血中のRvD2濃度を測定し、その治療経過や予後と比較検討を行う研究を行った。【実施計画】RvD2の血中濃度を測定するために、液体クロマトグラフィー(LC-MS/MS)を使用した。初年度は、RvD2(Cayman Chemical)と内部標準物質(d5-RvD2, Cayman Chemical)の濃度を変更し、LC-MS/MSでの発現を確認する実験を行った。【結果・考察】10ng/mLの濃度ではRvD2の明らかなピークを認め、同定が可能であったが、1ng/mLの濃度へ希釈すると、その発現はノイズの３倍程度まで減弱してしまった。ヒトにおける健常時のRvD2血中濃度は、25-45pg/mLと報告されている。本施設でのLC-MS/MSを使用したRvD2測定では、pg/mL単位まで希釈することは困難であると推察された。RvD2の別の測定手段として、ELISAキット(Cayman Chemical)を使用する方法がある。このキットでは、患者血液中のRvD2濃度をELISA法にて測定することが可能であり、pg/mL単位での測定が可能である。これらの測定で得られた患者血液中のRvD2濃度は、DHAの摂取量だけではなく、患者背景や合併症、ICU滞在期間、予後等の臨床経過とも比較検討を行う。

[目的] 各种动物实验报道表明，施用 Resolvin D2 (RvD2) 可预防侵袭后的继发性器官损伤，并改善治疗效果。 RvD2是二十二碳六烯酸（DHA）的代谢产物，最近一项针对严重创伤患者的研究报道，在预后不良的人群中，从DHA到RvD2的代谢途径受到抑制，这表明DHA可能无法有效地代谢为RvD2。炎。因此，申请人进行了一项研究，测量烧伤和创伤后入住ICU的患者血液中的RvD2浓度，并将结果与​​治疗进展和预后进行比较。 【实施方案】采用液相色谱法（LC-MS/MS）测定RvD2的血药浓度。第一年，我们通过改变RvD2（Cayman Chemical）和内标物质（d5-RvD2，Cayman Chemical）的浓度，进行了通过LC-MS/MS确认表达的实验。 [结果/讨论] 在10 ng/mL的浓度下，观察到清晰的RvD2峰并且可以进行鉴定，但是当稀释至1 ng/mL的浓度时，其表达减弱至噪声的约3倍。据报道，人类正常的 RvD2 血液浓度为 25-45 pg/mL。假设在该设施中使用 LC-MS/MS 测量 RvD2 时很难稀释至 pg/mL 水平。测量 RvD2 的另一种方法是使用 ELISA 试剂盒（Cayman Chemical）。利用该试剂盒，可以利用ELISA法测定患者血液中的RvD2浓度，并且可以以pg/mL为单位进行测定。通过这些测量获得的患者血液中的RvD2浓度不仅将与DHA的摄入量进行比较，还将与患者的背景、并发症、在ICU的住院时间以及临床病程（例如预后）进行比较。