転写因子を用いた高効率in vivo 造血幹細胞分化誘導法

使用转录因子的高效体内造血干细胞分化诱导方法

• 批准号: 15K19553
• 负责人: 二井 偉暢
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-01 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15K19553/
• 关键词: ヒトES細胞; ヒトiPS細胞; 造血幹細胞; 遺伝子導入; テラトーマ; ヒトES細胞; ヒトiPS細胞; 造血幹細胞; 遺伝子導入; テラトーマ

研究代表者はテラトーマ形成法と遺伝子導入法を組み合わせ、ヒトES/iPS細胞から高効率に造血幹細胞を分化誘導する方法の確立を試みた。研究代表者は研究期間内に①ヒトES/iPS細胞への候補遺伝子群の導入とテラトーマ形成、及び②ヒトCD34陽性細胞分画の解析を行った。①当研究室でヒト末梢血単核細胞から樹立したiPS細胞、及びWiCell Research Instituteより購入したヒトES細胞に申請書に示した候補遺伝子群を導入した。研究代表者はヒトES/iPS細胞をフィーダーフリー培養環境下で単一分散培養を行ない、遺伝子導入効率が90％以上と高い効率を示す方法を確立した。最もヒト細胞の生着の良いNOGマウスの下肢に遺伝子導入したヒトES/iPS細胞（100万細胞前後）を移植しテラトーマ形成を行った。コントロールとしてGFP発現ベクターを遺伝子導入した。また、遺伝子導入ベクターとしてエピソーマルベクターの利用の検討も行った。②テラトーマ形成後、テラトーマをマウス下肢より取り出し、トリプシン及びコラゲナーゼ処理を行なうことにより単一細胞にし、テラトーマ内のヒトCD34陽性細胞の分画をフローサイトメトリーで確認した。GFPを導入したヒトES/iPS細胞由来のテラトーマからはヒトCD34陽性細胞は確認できなかった。しかし、候補遺伝子導入群ではヒトCD34陽性細胞が低効率ではあるが確認された。

研究人员试图建立一种方法来诱导造血干细胞从人ES/IPS细胞分化，以高效的方式结合了畸胎瘤形成和基因转移。在研究期间，研究人员进行了1）将候选基因引入人ES/IPS细胞和畸胎瘤形成，以及2）分析人类CD34阳性细胞级分。 1）应用程序中列出的候选基因被引入我们的实验室和从Wicell研究所购买的人类ES细胞中的人类外周血单核细胞建立的IPS细胞中。研究人员建立了一种方法，该方法在无馈物培养环境中进行人类ES/IPS细胞的单分散培养物，显示出高效率的基因转移效率，高效率为90％或以上。将转导的人ES/IPS细胞（约100万细胞）移植到NOG小鼠的下肢，该小鼠的下肢具有最成功的人类细胞植入，并进行了畸胎瘤形成。 GFP表达载体被转染为对照。我们还研究了偶发向量作为基因转移载体的使用。 2）畸胎瘤形成后，从小鼠的下肢中去除畸胎瘤，并用胰蛋白酶和胶原酶处理形成单个细胞，并通过流式细胞术证实了畸胎瘤中人类CD34阳性细胞的比例。从已转染GFP的人类ES/IPS细胞的畸胎瘤中，无法确认人类CD34阳性细胞。然而，尽管它们效率低下，但在候选基因转移组中证实了人CD34阳性细胞。