テロメラーゼ活性を標的とした新規ウイルス療法の開発と化学療法との相互作用の解明

开发针对端粒酶活性的新型病毒疗法并阐明与化疗的相互作用

基本信息

批准号：
15025250
负责人：
藤原俊義
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15025250/
关键词：
テロメラーゼアデノウイルス hTERT ウイルス療法遺伝子治療

项目摘要

染色体DNA末端の短い塩基配列の繰り返しで構成されるテロメア長を保つ作用を持つ酵素テロメラーゼは、きわめて多くの癌細胞でその活性の上昇が知られている。構成分子hTERTの発現とテロメラーゼ活性が相関することが明らかになっており、多くの癌細胞ではhTERTプロモーターのスイッチがオンになり、その下流に組込まれた遺伝子が発現すると考えられる。アデノウイルスの増殖に必要なE1A遺伝子とE1B遺伝子をIRES配列で結合した発現カセットをhTERTプロモーターにより選択的に発現するTumor-specific Replication-competent Adenovirus(TRAD)を作成した。各種ヒト癌細胞においてテロメラーゼ活性は陽性であり、一方、線維芽細胞などの正常細胞では陰性であった。実際に、ヒト大腸癌細胞SW620およびヒト肺癌細胞H1299にTRADを感染させると、mRNAレベルおよび蛋白質レベルで選択的E1発現が認められた。それに一致して、TRAD感染後3日までに各種癌細胞においては10^5-10^8倍のウイルス複製増殖が認められたが、正常細胞では100-1000倍に抑えられていた。癌細胞では1 multiplicity of infection(MOI)のTRAD感染で、3日以内にcytopathic effect(CPE)が誘導され完全な細胞死が観察されたが、正常細胞ではTRAD感染後7日目でも細胞数の減少はみられなかった。ヌードマウス背部皮下に移植したH1299ヒト肺癌腫瘍にTRADを局所投与したところ、有意な増殖抑制が認められた。今後、TRADの生体内分布、免疫反応、各種抗癌剤との併用効果とその作用機序などを検討していく。

端粒酶负责维持端粒的长度，端粒由染色体 DNA 末端的重复短碱基序列组成，已知该酶在大量癌细胞中具有增强的活性。已揭示构成分子hTERT的表达与端粒酶活性相关，并且认为在许多癌细胞中，hTERT启动子被开启，并且整合在其下游的基因被表达。我们创建了一种具有肿瘤特异性复制能力的腺病毒 (TRAD)，它选择性地表达一个表达盒，其中腺病毒增殖所需的 E1A 和 E1B 基因通过使用 hTERT 启动子的 IRES 序列连接起来。端粒酶活性在多种人类癌细胞中呈阳性，而在成纤维细胞等正常细胞中呈阴性。事实上，当人结肠癌细胞SW620和人肺癌细胞H1299被TRAD感染时，在mRNA和蛋白质水平上观察到选择性E1表达。与此一致的是，TRAD感染后3天，在各种癌细胞中观察到病毒复制和增殖10^5-10^8倍，但在正常细胞中被抑制至100-1000倍。在癌细胞中，TRAD感染的复数感染（MOI）在3天内观察到细胞病变效应（CPE）并且细胞完全死亡，但在正常细胞中，即使在TRAD感染7天后，细胞数量也没有减少。观察到。当TRAD局部给予皮下移植到裸鼠背部的H1299人肺癌肿瘤时，观察到显着的生长抑制。未来我们将研究TRAD的生物分布、免疫反应、与各种抗癌药物联合的效果及其作用机制。