RhoファミリーG蛋白質群の時空間的制御と相互作用のFRETプローブによる解析

使用 FRET 探针分析 Rho 家族 G 蛋白的时空调控和相互作用

基本信息

批准号：
15024242
负责人：
黒川量雄
金额：
$ 3.78万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15024242/
关键词：
RhoA FRET ラメリポディアメンブレンラフリング

项目摘要

RhoファミリーGTP結合蛋白質は細胞骨格の調節を介して接着、運動、分裂を制御し、また細胞周期関連蛋白質群の発現調節にも関わる蛋白質群であり、細胞の悪性化、浸潤、転移にも働く。代表的なRhoファミリーG蛋白質、RhoA、Rac、Cdc42は、相互にその活性を制御することが報告されている。そこで研究代表者は、増殖因子刺激によるRhoA活性の経時変化、及び活性の空間情報をRac、Cdc42活性の時空間情報とあわせて得ることによって増殖因子依存的な細胞形態変化に対するRhoAの働きを解析してきた。EGF刺激したCos1細胞では、Rac1はラメリポディアを形成する直前に細胞全体で均一に活性化し、その後、メンブレンラフリングが続いているにもかかわらず、活性が速やかに減少した。Cdc42は、Rac1と同様に速やかに活性化されるが、その活性はRac1と異なり細胞辺縁部のメンブレンラフリングの部位でより高いことが明らかになった。このときRhoAは細胞膜の中心部、細胞内膜で速やかに不活性化され、メンブレンラフリングを生ずる部位では活性が推持されていることが明らかになった。優勢劣性型変異体Rac、Cdc42特異的GAPを用いた解析により、EGF依存的なRhoAの不活性化はRac活性に依存し、Cdc42活性には依存していないことが判明した。メンブレンラフリングに対するRhoAの役割を解析するために活性化型変異体Racと優勢劣性変異体RhoAを共発現したところ、活性化型Racによるラメリポディアの形成は阻害されないがメンブレンラフリングの誘導が著しく抑制されたことからメンブレンラフリングの誘導にRhoA活性の関与していることが示唆された。

Rho家族GTP结合蛋白是一种通过调节细胞骨架来控制粘附，运动和分裂的蛋白质，也与细胞周期性蛋白质基团的形成有关，还可以用于细胞恶性，浸润和转移。据报道，代表性的Rho家族G蛋白，RhoA，RAC和CDC42可以控制其活性。因此，研究代表分析了RhoA对生长因子依赖性细胞形式的工作，通过通过RAC刺激生长因子刺激，CDC42主动空间空间信息的加班变化。在EGF刺激的COS1细胞中，Rac1在形成片状脂蛋白之前在整个细胞中均匀激活，然后尽管Lembrane Revering继续进行，但活性迅速降低。 Cdc42迅速被激活，如Rac1所示，但已显示其活性与RAC1不同，在细胞边缘的机械线组位点较高。目前，据透露，在细胞膜，细胞子宫内膜中心迅速灭活了Rhoa，并在发生机械漂流的区域促进了Rhoa。使用特定间隙的分析，该差距主要是下型变量变体RAC和CDC42，已经表明，依赖EGF的RhoA被灭活，不依赖于Cdc42活性。强调激活型突变体RAC和显性变质的变异变体RhoA，以分析RhoA在膜漂流中的作用，激活的RAC的层状podia的形成并不抑制，而是被抑制摘要受到了极大的抑制。