ES細胞からの内胚葉細胞系譜制御遺伝子プロファイリング解析

ES 细胞的内胚层细胞谱系控制基因谱分析

基本信息

批准号：
15011246
负责人：
粂昭苑
金额：
$ 3.84万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

申請者らが構築したES細胞から膵への分化誘導系において、アフリカツメガエルのmixファミリーのニワトリホモログであるc-mix遺伝子を強制発現させた結果、膵への分化誘導能が促進されたことを見い出している。このc-mix遺伝子強制発現ES細胞株と、対照株との遺伝子発現プロファイリング解析を行い、内胚葉誘導に関与する遺伝子群の同定出来ると考えられた。本研究ではDNAチップを用いた遺伝子解析を行なうと共に、rt-pcr法により、遺伝子導入株では内胚葉分化マーカーの発現が上昇していることを示した。今後はここで絞られた候補について、さらにアフリカツメガエル初期胚で強制発現させ、内胚葉誘導活性についてスクリーニングを続ける予定である。さらに、pdx-1-GFPトランスジェニックマウスより、ES細胞を樹立し、生きた状態でpdx-1の遺伝子発現を追跡可能の系を確立した。また、申請者らはこれまでに、ES細胞からの膵への分化誘導を支持する細胞を複数同定してきた。これら支持細胞を用いて、ES細胞から膵へ効率良く分化誘導された。さらに、ES細胞からの分化誘導の条件を無血清条件でアッセイできる系を確立し、TGFβ2を添加することにより、顕著な膵分化誘導を認めた。このように、これまでに確立した実験系では、充分に効率よくES細胞から膵へ分化を誘導することができたので、ES由来の膵幹細胞を今後セルソーターを用いて純化し、遺伝子発現プロファイリングなどによる細胞生化学的解析を進めようと考えている。

在申请人建造的ES细胞中，C-MIX基因是非洲肿瘤青蛙的鸡家族，已促进了胰腺的胰腺衍生物能力。据认为，可以鉴定出具有对比菌株的C-MIX基因强迫ES细胞库存和基因表达分析分析，并且可以鉴定出与内胚层诱导有关的基因组。在这项研究中，使用DNA芯片的基因分析表明，RT-PCR方法增加了基因引入菌株中内胚层化标记的表达。将来，在这里缩小的候选人将被迫用早期的非洲青蛙最初的胚胎表达，并将继续对内胚层的归纳进行筛查。此外，从PDX-1-GFP转基因小鼠中，已经建立了ES细胞，建立了一个可以在生存过程中跟踪PDX-1遗传表达的系统。此外，申请人已经确定了几个支持从ES细胞分化为胰腺的细胞。使用这些支持细胞，从ES细胞有效诱导ES细胞到胰腺。此外，可以在NERM Orglum条件下测定与ES细胞分化诱导的术语，并将TGFβ2的添加添加到显着的胰腺诱导中。通过这种方式，在到目前为止已经建立的实验系统中，它已经能够诱导从ES细胞到胰腺的分化，因此将来将使用Collestuster和Gene表达分析等纯化从ES衍生的胰腺细胞进行纯化我们计划进行蜂窝生化分析。