光化学系1反応中心色素蛋白複合体の分子構築と光受容機能の解析

光系统1反应中心色素蛋白复合物的分子构建及光感受器功能分析

基本信息

批准号：
62621503
负责人：
桧山哲夫
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Saitama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-62621503/
关键词：
光化学系1 P700 P430 光合成高等植物鉄イオウ蛋白膜蛋白

项目摘要

1.光化学系1反応中心色素蛋白複合体標品を純化精製する方法について従来から用いて来た方法に再検討を加えた. その結果, これまで用いていたイオン交換クロマトグラフィーの材料方法に改良を加えたり新にハイドロキシアパタイトを採用したりしたことで調製に要する時間を大巾に短縮出来た上, 収率も良くなった. 得られた標品は従来のものに比べて, 分解産物と考えられる副成分はほとんど含まれていない.2.この副合体を更に強く界面活性剤処理し構成する個々のサブユニット成分を分別精製することを試みた. その結果, 最小成分である9KD_aポリペプチドについて高度の純化に成功した. アミノ基本端のアミノ酸配列を32番目まで分析し, 更にカルボキシ末端についても分析した結果をすでに発表されているタバコ及びゼニゴケ葉緑体DNAの塩基配列の中に検索したところ未同定のGENEに極めて相同性の高いものを見つけた. これによりこの蛋白の一次構造が推定された. 9コのシステイン残基を含み, そのうち8コの配列はすでにいくつかの細菌に知られているフェレドキシン(4鉄4イオウ蛋白)におけるそれと非常に良く似ていることが分った. このことはこの蛋白が低温EPR測定から知られているCenter A, Bの二つの鉄イオウ中心のアポ蛋白であることを強く示唆する.3.上記複合体を更に注意深く界面活性剤処理し直ちにゲル〓過を行って, 二種の大型サブユニットのみを含む反応中心標品を収率良く得た. P700及びP430の光化学活性はほぼ定量的に保存されていて長期の凍結保存にも安定である. Center A, Bは全く含まれていない. P700あたり4原子の鉄が含まれていることが分った. 詳細な分析は現在継続進行中である.

1.我们重新审视了光系统1反应中心色素蛋白复合物制剂的常规纯化方法，结果，我们改进了迄今为止使用的离子交换层析的材料方法，通过添加羟基磷灰石并新采用羟基磷灰石，缩短了所需的时间。制备时间显着缩短，收率也得到提高。它几乎不含有被认为是分解产物的子成分。 2. 我们尝试用表面活性剂更强烈地处理该子组件，以分离和纯化构成它的各个子单元成分。结果，我们发现最小的成分是We。我们成功地高度纯化了9KD_a多肽，并分析了直至第32个氨基酸碱基末端的氨基酸序列。此外，当我们检索已经发表的烟草和苔类叶绿体DNA的羧基末端分析结果时，我们发现了与未鉴定的GENE高度同源的序列，其中包含9个半胱氨酸。残基，其中八个序列与我所了解的某些细菌中已知的铁氧还蛋白（一种 4-铁-4-硫蛋白）的序列非常相似。这强烈表明该蛋白质是具有两个铁硫中心（中心A和B）的脱辅基蛋白，这通过低温EPR测量得知。 3.将上述复合物进一步用表面活性剂仔细处理并通过过滤立即胶凝。以良好的收率获得了仅含有两种类型的大亚基的反应中心制剂，即使在长期冷冻储存期间，P700和P430的光化学活性也保持稳定。发现P700含有4个铁原子。目前正在进行详细分析。