光化学系1反応中心色素蛋白複合体の分子構築と光受容機能の解析

光系统1反应中心色素蛋白复合物的分子构建及光感受器功能分析

基本信息

批准号：
62621503
负责人：
桧山哲夫
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Saitama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-62621503/
关键词：
光化学系1 P700 P430 光合成高等植物鉄イオウ蛋白膜蛋白

项目摘要

1.光化学系1反応中心色素蛋白複合体標品を純化精製する方法について従来から用いて来た方法に再検討を加えた. その結果, これまで用いていたイオン交換クロマトグラフィーの材料方法に改良を加えたり新にハイドロキシアパタイトを採用したりしたことで調製に要する時間を大巾に短縮出来た上, 収率も良くなった. 得られた標品は従来のものに比べて, 分解産物と考えられる副成分はほとんど含まれていない.2.この副合体を更に強く界面活性剤処理し構成する個々のサブユニット成分を分別精製することを試みた. その結果, 最小成分である9KD_aポリペプチドについて高度の純化に成功した. アミノ基本端のアミノ酸配列を32番目まで分析し, 更にカルボキシ末端についても分析した結果をすでに発表されているタバコ及びゼニゴケ葉緑体DNAの塩基配列の中に検索したところ未同定のGENEに極めて相同性の高いものを見つけた. これによりこの蛋白の一次構造が推定された. 9コのシステイン残基を含み, そのうち8コの配列はすでにいくつかの細菌に知られているフェレドキシン(4鉄4イオウ蛋白)におけるそれと非常に良く似ていることが分った. このことはこの蛋白が低温EPR測定から知られているCenter A, Bの二つの鉄イオウ中心のアポ蛋白であることを強く示唆する.3.上記複合体を更に注意深く界面活性剤処理し直ちにゲル〓過を行って, 二種の大型サブユニットのみを含む反応中心標品を収率良く得た. P700及びP430の光化学活性はほぼ定量的に保存されていて長期の凍結保存にも安定である. Center A, Bは全く含まれていない. P700あたり4原子の鉄が含まれていることが分った. 詳細な分析は現在継続進行中である.

1。我们重新审查了净化和净化光系统反应中央染料蛋白蛋白复合物制备的常规方法。结果，使用了先前使用的离子交换色谱材料方法和新的羟基磷灰石的改进，从而大大减少了制备所需的时间，并提高了产量。与常规的制剂相比，获得的制剂几乎没有被认为是降解产物的亚组件。 2。我们试图通过更强烈的处理来处理构成子综合的单个亚基组件并改进各个亚基组件。结果，我们成功纯化了最小的组件9KD_A多肽。将基本氨基端的氨基酸序列分析至第32位。此外，在已经发表的烟草和叶绿体DNA的核苷酸序列中搜索了羧基末端的分析结果，并发现它们与身份不明的基因具有很高的同源性。这确定了该蛋白质的主要结构。它包含9个半胱氨酸残基，其中有8种与铁氧还蛋白（4-铁4-硫蛋白）非常相似，这是某些细菌已经知道的。这强烈表明该蛋白是载脂蛋白，其中有两个铁硫中心A和B，这是从低温EPR测量中已知的。 3。用更谨慎的表面活性剂处理配合物并立即凝胶处理，并以良好的产率获得了一个只有两个大亚基的反应中心标本。 P700和P430的光化学活性几乎是定量保存的，并且用于长期冷冻保存。中心A和B根本不包括。发现每P700的铁原子包含4个原子。目前正在进行详细的分析。