鉄欠乏に応答する小胞体由来ムギネ酸顆粒の形成

缺铁时内质网衍生的 muginate 颗粒的形成

基本信息

批准号：
19039007
负责人：
中西啓仁
金额：
$ 2.69万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19039007/
关键词：
イネムギネ酸類細胞内輸送日周性

项目摘要

ムギネ酸分泌トランスポーター候補遺伝子の解析。オオムギ、イネの鉄欠乏根でのマイクロアレイ解析によりムギネ酸の分泌のトランスポーターの候補遺伝子がいくつか上がってきている。これらのうちでもっとも可能性の高そうな遺伝子A(遺伝子についての詳細は記述しない)を用い、そのイネでの鉄欠乏による発現パターンの変化、抗体の作成、過剰発現体、RNAiによる発現抑制体の作成を行った。作成したイネを鉄欠乏、鉄十分条件下で栽培し、その分泌するムギネ酸量、あるいは根中のムギネ酸、ニコチアナミン量を測定することによりこの遺伝子がムギネ酸分泌に関わっているのかどうか検定を行った。鉄欠乏処理により存在量の変化するタンパク質の検索。鉄欠乏処理をしたイネとコントロールとして鉄十分で栽培したイネの根からタンパク質、特に膜タンパク質に注目して単離を行った。SDSを含むバッファーで抽出することにより、膜成分をリッチに含む画分を調整した。これを奈良先端科学技術大学院大学の深尾陽一朗先生が開発したSDSを含むバッファーを用いても等電点電気泳動できる手法を用いて二次元電気泳動を行った。鉄欠乏とコントロールの根での二次元電気泳動パターンを比較することで、それぞれに特徴的なスポットを切り出し、いくつかのタンパク質については同定することができた。ムギネ酸生合成の鍵酵素の一つであるニコチアナミン合成酵素の遺伝子OsNAS2をGFPタンパク質との融合タンパク質としてOsNAS2遺伝子のプロモーターの制御下で発現する遺伝子導入イネを作成した。作成したイネを鉄欠乏栽培してその根を蛍光顕微鏡で観察したところ、GFPの蛍光が顆粒状に存在することが分かった。

分析候选Muginate分泌转运蛋白基因。大麦和大米的铁根根中的微阵列分析导致小麦酸分泌转运蛋白的几个候选基因的兴起。基因A（最有可能发现基因的细节将被描述）用于改变水稻缺乏症，使用RNAi创建抗体，过表达和抑制器，以改变水稻的表达模式。在铁缺乏症和足够的铁条件下培养了制备的大米，并通过测量wguinate分泌的量以及根中的wguinate和烟胺和烟胺的量来测试该基因是否参与了穆平植物分泌。搜索由于铁缺乏治疗而导致丰度变化的蛋白质。用铁缺乏治疗的水稻的根和用足以对照生长的水稻的根集中在蛋白质上，尤其是膜蛋白。通过用含有SD的缓冲液提取含有丰富膜成分的馏分。这是通过二维电泳使用二维电泳进行的，该方法可以使用含有奈良科学技术研究所的福Kao Yoichiro教授开发的含有SDS的缓冲液来实现。通过比较铁缺乏症和控制根中的二维电泳模式，我们能够为每个斑点切除独特的斑点并识别一些蛋白质。转基因大米是由烟胺合酶的基因OSNAS2生产的，烟胺合酶是粘液蛋白生物合成中的关键酶之一，作为与GFP蛋白的融合蛋白，在OSNAS2基因启动子的控制下表达基因。在荧光显微镜下观察到制备的大米，并在荧光显微镜下观察到其根，发现GFP荧光以颗粒状形式存在。

项目成果

期刊论文数量（6）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Regulation of iron-acquisition-related rice genes by novel iron-deficiency-responsive cis-acting elements, IDE1 and IDE2

新型缺铁反应性顺式作用元件IDE1和IDE2对铁获取相关水稻基因的调控

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
Kobayashi T;Nakayama Y;Yoshihara T;Suzuki M;Inoue H;Itai RN;Ogo Y;Takahashi M;Nakanishi H;Mori S;Nishizawa NK
通讯作者：
Nishizawa NK

ムギネ酸類合成に関わる遺伝子群を制御する転写因子OsIRO2過剰発現イネは鉄欠乏耐性を示す

过度表达 OsIRO2（一种控制参与麦根酸合成的基因的转录因子）的水稻表现出缺铁耐受性。