ヘム依存性転写制御複合体の構造と機能

血红素依赖性转录调节复合物的结构和功能

基本信息

批准号：
18054002
负责人：
石森浩一郎
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

ヘム依存性転写因子Irrにおける酸化修飾機構の詳細を検討するため,典型的なペプチド鎖の酸化修飾様式であるカルボニル化を認識する「Oxyblot」法を用いて検討したところ,過酸化水素のスカベンジャー試薬であるカタラーゼを添加した際に酸化修飾が大きく阻害されることを見出した.一方,OHラジカルやO_2-のスカベンジャー試薬の添加ではその阻害効果が見られなかったことから,Irrはヘムと分子状酸素の存在下で過酸化水素を産生し,この過酸化水素によってペプチド鎖の酸化修飾反応が引き起こされることが示された.さらに,以上のような過酸化水素の産生部位を同定するために,ヘムの軸配位子と想定されるCysやHisをそれぞれAlaに置換し,その酸化修飾反応を追跡したところ,His残基が連続しているHis117,His118,His119の置換により酸化修飾反応が大きく阻害されることが示された.しかし,この変異体において産生する過酸化水素の定量を行ったところ,野生型同様の産生能を示し,過酸化水素は酸化修飾には必須であるものの,ペプチド鎖への酸化修飾反応の直接的な活性種ではないことが示唆された.づまり,Irrによって産生された過酸化水素は,再びHis117,His118,His119付近の酸化活性化部位によって,さらに活性な酸化活性種に変換されることを示唆している.以上の結果からIrrにおける酸化修飾反応は,分子状酸素から過酸化水素を経た二段階の活性化反応で進行し,そこで生成した酸化活性種が蛋白質分解の端緒となることが考えられる.

为了检查下摆依赖性转移因子IRR中氧化修饰机制的细节，它将使用识别碳化化的“ oxyblot”方法检查，这是典型的肽链氧化物修饰，当添加过催化酶时，它是发现氧化物的修饰显着抑制，因为没有看到OH自由基和O_2-螺钉蜜蜂试剂的添加。当Cys及其假定为下摆轴时，这种过氧化氢会导致肽链的氧化物 - 氧化物反应，并用ALA代替，并跟踪氧化物修饰剂反应，替代His117，His118和His119，然而，当该突变体中定量的过氧化氢的生产力表明，尽管他的氧化物反应与野生型相同，但它被抑制了大量的氧化物。氧化物的修饰，建议它不是对链的氧化物修饰反应的直接活性表明它是从上述结果转化为活性物种的。分解。