病原性真菌カンジダ属における誘導型プロモーターを用いた感染分子機構の網羅的研究

病原真菌念珠菌诱导型启动子感染分子机制的综合研究

• 批准号: 16017219
• 负责人: 知花 博治
• 金额: $ 8.06万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16017219/
• 关键词: ゲノム創薬; 遺伝子組換え; 分子標的; 日和見感染; 深在性真菌症

欧米において真菌はウィルス,細菌,原虫とならび重要な感染症原因菌とされており基礎研究が活発に行われている。病原真菌の中でもカンジダ(Candida)は化学療法により治療中の癌患者、エイズや免疫抑制剤等の投与によって易感染状態になった患者に対して重篤な深在性感染症を起こす真菌として知られ問題となっている。我々はカンジダについてゲノムワイドな研究を進め生物学的に深く理解することにより優れた抗真菌薬標的遺伝子の開発を目指している。カンジダ属のうち、患者から最も高頻度で分離されるのはCandida albicansであり,次にC.glabrataである。最近C.glabrataの症例が増加傾向にあり特に問題となっている。C.glabrataは、分子分類学的にパン酵母(Saccharomyces cerevisiae)に近縁であり、S.cerevisiaeにおいて蓄積されたゲノム情報等の膨大は基礎研究データと比較することが容易である。このため、我々は研究の上でC.glabrataを用いた実験系を中心にカンジダの研究を進めている。まず、C.glabrataのゲノムライブラリーを作製しシークエンスを決めプロモーター領域を決定した。次にプラスミド上でプロモーター領域を人為制御型プロモーターに組換え、PCR法により組み換えたDNAを増幅し,C.glabrataに導入すると相同的組換えによりオリジナルのプロモーター領域が人為制御型プロモーターに置換した。平成16年度はC.albicansに相同性の高いC.glabrataの50遺伝子について組換え体を構築した。約5,300の全遺伝子を乗せたDNAチップを構築するため、各70塩基から成る合成オリゴDNAセットを共同開発した。平成17年度は組み換え体作製法の改良、500遺伝子について組換え体DNAチップの構築を実施する。

真菌被认为是一种病毒，细菌和原生动物，以及重要的感染性疾病致病细菌，并且正在积极进行基础研究。在致病性真菌中，念珠菌是一种真菌，在通过化学疗法接受治疗的癌症患者中引起严重的，深层感染的疾病，或者由于施用艾滋病或免疫抑制剂而受到免疫感染的人，并已知并成为问题。我们旨在通过对念珠菌进行全基因组的研究并获得更深入的生物学理解来发展出色的抗真菌靶基因。在念珠菌物种中，与患者最常分离的是白色念珠菌，其次是glabrata。最近，C. glabrata的病例正在上升，这已成为一个特别有问题的问题。 C. glabrata与Baker的酵母（酿酒酵母）分子相关，并且与基础研究数据相比，可以很容易地将积累的大量基因组信息与酿酒酵母中的大量信息进行比较。因此，我们正在对念珠菌进行研究，重点是使用C. glabrata进行实验系统。首先，制备了C. glabrata的基因组文库，并确定序列，并确定启动子区域。接下来，将启动子区域与质粒上的人为控制的启动子重新组合，并通过PCR扩增重组的DNA，当引入Glabrata C. glabrata时，原始启动子区域被同源重组用人为控制的启动子代替。 2004年，为50种与白色念珠菌具有高同源性的Glabrata基因构建了重组。为了构建一个包含大约5300个基因的DNA芯片，共同开发了由70个碱基组成的合成寡核DNA集。在2005财年，我们将改善重组生产方法，并为500个基因构建重组DNA芯片。

项目成果

Effect of the Major Repeat Sequence (MRS) on chromosome segregation in Candida albicans

主要重复序列 (MRS) 对白色念珠菌染色体分离的影响

• 期刊: Eukaryotic cells (印刷中)
• 作者: Lephart PR;Chibana H;Magee PT
• 通讯作者: Magee PT

A mutation in IRO1 tightly linked with URA3 gene reduces virulence of Candida albicans

与 URA3 基因紧密相连的 IRO1 突变降低了白色念珠菌的毒力

• 发表时间: 2005
• 期刊: Microbiol Immunol 49(10)
• 作者: H Chibana;J Uno;N Oka;Y Mikami
• 通讯作者: Y Mikami

The diploid genome sequence of Candida albicans

• DOI: 10.1073/pnas.0401648101
• 发表时间: 2004-05-11
• 期刊: PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
• 影响因子: 11.1
• 作者: Jones, T;Federspiel, NA;Scherer, S
• 通讯作者: Scherer, S