「小胞状構造体」の形成に関わる細菌細胞膜のダイナミクス

参与“囊泡结构”形成的细菌细胞膜动力学

基本信息

批准号：
16013221
负责人：
村田幸作
金额：
$ 2.62万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

高分子物質アルギン酸を直接細胞質に取り込むグラム陰性(スフィンゴモナス属)細菌(A1株)において、細胞表層分子の流動再編成により生じるアルギン酸濃縮器官(体腔)の形成機構を、分子レベルで解析した。プロテオーム解析により、体腔の形成と機能に関わる候補タンパク質として、8種類の細胞表層をタンパク質[p1-p4,シデロフォア依存的鉄トランスポーター;p5-p6,フラジェリン;P7,機能不明リポタンパク質;p8,顆粒結合タンパク質(ホモロジー解析による推定)]を見出した。そこで、p5,p6,p8の機能解析を進めた。p6或いはp8遺伝子破壊株はアルギン酸最少培地において、野生株と比較して有意な生育遅延を示した。また、p6遺伝子破壊株は、野生株と比較して、細胞表層において不鮮明な襞構造と不完全な体腔を示した。抗p5抗体を用いた免疫電顕により、P5は細胞表層に点在することが分かった。表面プラズモン共鳴法により、p5とp6は、アルギン酸と濃度依存的に結合し、それらの解離定数は〜10^<-9>Mレベルであることが判明した。p8は、アルギン酸と結合するが、同時に解離する性質(K_d=10^<-7>M)も認められた。以上の結果から、A1株において、フラジェリンホモログは、鞭毛形成よりも細胞表層タンパク質として、細胞外アルギン酸との相互作用、並びに襞構造の構築と体腔の形成に機能することが明らかになった。特に、アルギン酸と高い結合性(K_d=10^<-9>M)を示すことから、「体腔」の形成や代謝酵素の発現を制御するシグナル伝達に関わるレセプターとして機能する可能性が考えられた。このことは、鞭毛の起源と進化を理解する上で重要である。また、p8が、ペリプラズム局在性アルギン酸結合タンパク質と、同等のアルギン酸解離定数を示すことは、p8のアルギン酸との結合・解離能と体腔のアルギン酸濃縮機能との関連を実証する手がかりになると判断できる。

在革兰氏阴（Spingomonas属）细菌（A1股）中，该细菌直接掺入了聚合物物质藻酸中的细胞质中，分析了精氨酸浓缩器官（体腔）的机制，该机制由细胞表面分子分子的流动重组产生。分子水平。通过蛋白质分析，八种类型的细胞表面层与体腔形成和功能有关结合蛋白（通过同源分析估计）。因此，进行了P5，P6，P8的功能分析。与野生菌株相比，P6或P8遗传破坏菌株在最小藻酸培养基中显示出显着增长的延迟。与野生菌株相比，P6基因破坏性菌株在细胞表面层显示出不清的褶皱和不完整的体腔。发现一种抗-p5抗体散布在细胞表面层中。表面等离子体共振方法表明，P5和P6依赖于精氨酸，其解剖常数为10^<-9> m水平。 P8与精氨酸结合，但也具有同时解离的特性（k_d = 10^-7> m）。从上述结果中可以明显看出，在A1共享中，Flagerinhomos充当细胞表面蛋白，而不是叶毛的形成，与细胞外藻酸相互作用，以及折叠结构的形成和体腔的形成。特别是，通过用藻酸指示高键（k_d = 10^<-9> m），它可以作为与正式传播相关的受体起作用，该受体控制着“体腔”的形成和表达代谢酶。这对于理解国旗头发的起源和演变很重要。还可以确定P8显示P8中P8藻酸与P8的藻类富集功能与相同的等效藻酸卵形炎和相同的等效藻酸粘合蛋白之间的关系。

项目成果

期刊论文数量（12）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Origin and diversity of bacterial alginate lyases of families PL-5 and -7 in Sphingomonas sp. strain A1

鞘氨醇单胞菌 PL-5 和 -7 家族细菌藻酸盐裂合酶的起源和多样性。

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Journal of Bacteriology 186(9)
影响因子：
0
作者：
Yasuhiro Ooki;Toshiki Uchiumi;Yasuyo Tsukushi;Werner Klipp;Kim Y.et al.;Sugiyama M. et al.;Liu H.et al.;Auesukaree C. et al.;杉山峰崇他;Liu H.et al.;Wataru Hashimoto;Jinshan He;Osamu Miyake;Masayuki Yamasaki;Takafumi Itoh;Osamu Miyake
通讯作者：
Osamu Miyake

Structure and function of a hypothetical Pseudomonas aeruginosa protein PA 1167 classified into family PL-7: a novel alginate lyase with a β-sandwich fold.

属于 PL-7 家族的假设铜绿假单胞菌蛋白 PA 1167 的结构和功能：一种具有 β-夹心折叠的新型藻酸盐裂解酶。

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Journal of Biological Chemistry 279(30)
影响因子：
0
作者：
Yasuhiro Ooki;Toshiki Uchiumi;Yasuyo Tsukushi;Werner Klipp;Kim Y.et al.;Sugiyama M. et al.;Liu H.et al.;Auesukaree C. et al.;杉山峰崇他;Liu H.et al.;Wataru Hashimoto;Jinshan He;Osamu Miyake;Masayuki Yamasaki
通讯作者：
Masayuki Yamasaki