細胞マイクロアレイ法を用いた自己抗体遺伝子の同定および自己免疫疾患の病態解析

细胞芯片法鉴定自身抗体基因及自身免疫性疾病病理分析

基本信息

批准号：
14013024
负责人：
岸裕幸
金额：
$ 3.97万
依托单位：
Toyama Medical and Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

重症筋無力症や甲状腺機能亢進症等に代表される自己免疫疾患はアセチルコリン受容体や甲状腺刺激ホルモン受容体などに対する自己抗体が産生されることにより引き起こされると考えられている。このような自己免疫疾患の発症には環境要因の他に遺伝的要因が考えられる。遺伝的要因として腫瘍組織適合抗原(MHC)と自己免疫疾患との関連が詳細に研究されている。その他の遺伝的要因のひとつに抗体遺伝子の多型性が考えられるが、抗体遺伝子の多型性と自己免疫疾患との関連については未だ研究が進んでいない。我々は、自己免疫疾患患者の自己抗体を遺伝子レベルでハイスループットな解析を行うために、自己抗原特異的Bリンパ球のクローンレベルでの同定ならびに自己抗体遺伝子のPCRによる増幅を、一つのチップ上で行うことができるような細胞マイクロアレイ法の樹立を目的として、以下の基礎的研究を行った。1.1個のヒトBリンパ球から抗体遺伝子を増幅・クローニングする方法を確立するために、ヒト免疫グロブリン(Ig)V領域の各ファミリーに共通なプライマーを設計し、1個のヒトBリンパ球から抗体遺伝子を増幅する条件を設定した。2.抗原特異的Bリンパ球の検出を改造型DNAマイクロアレイスキャナーを用いて行うために最適なマイクロウェルアレイチップの材質、形状等の最適化を行った。3.マイクロウェルチップへのリンパ球の分注方法を確立するために、自動スポッティング装置等の使用を含め、種々の方法を試みた。1、2に関してはほぼ条件設定が終わった。3に関しては自動スポッティング装置に関して検討を続けている。現在、プロトタイプのシステムの構築が完成に近づいており、実際の自己抗原を用いた疾患の解析を行おうとしている。

人们认为自身免疫性疾病（如肌动症）和甲状腺功能亢进症被认为是由针对乙酰胆碱受体和甲状腺刺激的激素受体产生的自身抗体引起的。除了环境因素外，还可以考虑用于发展这种自身免疫性疾病的遗传因素。详细研究了肿瘤组织相容性抗原（MHC）和自身免疫性疾病之间的关联。另一个遗传因素是抗体基因的多态性，但研究尚未在抗体基因和自身免疫性疾病的多态性之间进行研究。为了对基因水平的自身免疫性疾病患者的自身抗体进行高通量分析，我们进行了以下基础研究，目的是建立一种细胞微阵列方法，允许通过在Clonal级别鉴定自动抗体特异性B淋巴细胞，并通过PCR On On On One On One On One On One On pcr。 1。为了建立一种从一个人类B淋巴细胞扩增和克隆抗体基因的方法，设计了每个人类免疫球蛋白（Ig）V区域共有的引物，并设置了从一个人B淋巴细胞中扩增抗体基因的条件。 2。优化了微孔阵列芯片的材料和形状，这是使用改良的DNA微阵列扫描仪检测抗原特异性B淋巴细胞的最佳选择。 3。已尝试使用各种方法，包括使用自动斑点设备，以建立将淋巴细胞分配到微孔尖端的方法。几乎设定了1和2的条件。关于3，我们正在继续考虑自动发现设备。目前，原型系统的构建正在完成，我们正在尝试使用实际的自我抗原来分析疾病。