B細胞シグナル伝達系におけるKuの役割に関する研究

Ku在B细胞信号系统中的作用研究

• 批准号: 13037015
• 负责人: 森尾 友宏
• 金额: $ 2.94万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13037015/
• 关键词: Ku70; 80; TCF1; HMG; CD95; 転写調節; degradation; class switch; IL-4R; CD40; Fcε receptor; gene regulation

#1 Ku70/80とTCF1/LEFファミリータンパクの会合とその部位の同定CD40細胞内領域でKu70/80と会合する部位のホモロジー検索から、Ku70/80がTCF1と会合することが明らかになった。TCF1はHigh Mobility Group (HMG)タンパクであるが、Sox11, HMG2などはKuと会合し、Sry, Sox4, Sox22などは会合しなかった。さらに結合部位を同定するため、Ku70を7つ、Ku80を8つの部位に分けてGSTとの融合タンパクを作成した。まずKu70が会合に関与していることが明らかになり、N末端とC末端の両方に会合部位があるらしいことがわかっている。#2 Ku70/80とTCF1の会合の生理学的意義の検討TCF1とβ-cateninで転写調節されるレポーター遺伝子アッセイ系を用いて、Kuの関与を検討したところ、dominant negative (DN) Ku80は転写を抑制し、Ku70/80がTCF1/β-catenin転写系に重要であることが明らかになった。#3 Ku70/80によるCD95の発現調節の解析CD95の5'UT領域におけるKu70/80の会合部位を検討した。また5'UTをluciferase reporter gene systemに導入し、DN Kuの効果を検討し、その抑制効果を確認した。#4 新規免疫抑制剤TautomycetinのKuに対する作用の解析TautomycetinはT細胞特異的にアポトーシスを誘導するが、その際にKu70/80の分解を伴っていることを見出した。Ku70/80の分解はcaspaseカスケードによるものが少なくとも一部関与していることが判明している。#5 Ku70/80欠損患者の探索Ku70/80の変異によりB細胞 and/or T細胞異常をきたす疾患がないか、重症複合型免疫不全症患者を中心に検討を加えた。

＃1 KU70/80和TCF1/LEF家族坦帕库会议和同源性搜索与该网站CD40细胞区域相遇Ku70/80的零件显示，Ku70/80符合TCF1的KU70/80。 TCF1是一个高迁移率组（HMG）蛋白，但是SOX11和HMG2符合KU，并且不遇到Sry，Sox4，Sox22，Ett。为了进一步识别连接位点，通过将七个KU70和KU80分为八个部分来创建具有GST的融合蛋白。首先，已经揭示了Ku70参与了会议，并且发现N-期限和C条款都有一个会议地点。考虑到＃2 KU70/80和TCF1会议TCF1和β-catenin的生理意义，我们使用报告基因测定系统检查了KU的参与，并且抑制了KU70/80对KU70/80重要的TCF1/β-catenin转移系统。在CD95表达调整的CD95分析的5'UUT区域中检查了KU70/80会议地点，＃3 KU70/80。此外，将5'UT引入到荧光素酶报告基因系统中，检查了DN KU的作用，并确认了其抑制作用。 ＃4新的免疫抑制剂乳霉素六霉素的作用分析诱导的细胞凋亡是特异性T细胞，但发现它伴随着KU70/80的分解。已经发现，Ku70/80的分解至少部分与caspase Cascade有关。为了寻找＃5 KU70/80缺乏的患者，已经针对患有严重复合免疫效应的患者进行了KU70/80的突变，无论是否存在引起B细胞和或T细胞异常的疾病。

项目成果

Zhu Y, Nonoyama S, Morio T, Muramatsu M, Honjo T, Mizutani S: "Type two Hyper-IgM syndrome caused by mutation in activation induced cytidine deaminase"Journal of Medical and Dental Sciences. (in press). (2003)

Zhu Y、Nonoyama S、Morio T、Muramatsu M、Honjo T、Mizutani S：“由激活诱导胞苷脱氨酶突变引起的二型高 IgM 综合征”医学和牙科科学杂志。

Jo EK: "Characterization of mutations, including a novel regulatory defect in the first intron, in Bruton's tyrosine kinase gene from seven Korean X-linked agammaglobulinemia families"Journal of Immunology. 167. 4038-4045 (2001)

Jo EK：“来自七个韩国 X 连锁无丙种球蛋白血症家族的布鲁顿酪氨酸激酶基因的突变特征，包括第一个内含子中的新调控缺陷”《免疫学杂志》。

Imai M, Mizutani S, Morio T: "Coordinated Regulation of the Promoter and Enhancer Regions of Human CD23 Gene by Signal Through IL-4R and CD4O, and the Role of Ku70/80 in the Enhancer Activity"Journal of Medical and Dental Sciences. (in press). (2003)

Imai M、Mizutani S、Morio T：“通过 IL-4R 和 CD4O 信号协调调节人 CD23 基因的启动子和增强子区域，以及 Ku70/80 在增强子活性中的作用”医学和牙科科学杂志。

Kawai S: "Flow cytometric determination of intracytoplasmic Wiskott-Aldrich syndrome protein in peripheral blood lymphocyte subpopulations"Journal of Immunological Methods. 260. 195-205 (2002)

Kawai S：“外周血淋巴细胞亚群中胞浆内 Wiskott-Aldrich 综合征蛋白的流式细胞术测定”免疫学方法杂志。

Kimura-Oyoshi M, Nagata H, Kimura N, et al. (13名中10番目): "Preferential expansion of Vγ9-JγP/Vδ2-Jδ3 γδ T-cells in nasal γδ T-cell lymphoma and chronic active Epstein-Barr virus (EBV) infection"American Journal of Pathology. (in press). (2003)

Kimura-Oyoshi M、Nagata H、Kimura N 等人（13 名中的第 10 名）：“Vγ9-JγP/Vδ2-Jδ3 γδ T 细胞在鼻 γδ T 细胞淋巴瘤和慢性活动性 Epstein-Barr 病毒中的优先扩增（EBV）感染”美国病理学杂志。（印刷中）。（2003）