HIVベクターの開発

HIV载体的开发

基本信息

批准号：
12217142
负责人：
島田隆
金额：
$ 35.39万
依托单位：
Nippon Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12217142/
关键词：
遺伝子治療ウイルスベクター HIVベクター挿入変異血管新生リンパ腫多発性骨髄腫膵癌血管新生阻害エンドスタチンアンギオスタチン白血病非分裂細胞血管新生抑制因子骨髄幹細胞アデノウイルスベクターエイズ ATL

项目摘要

HIVベクターの開発と癌の遺伝子治療の可能性について検討した。1)HIVベクターの改良:レトロウイルスベクターによる白血病の報告を受け、HIVベクターの挿入変異による細胞の癌化の可能性を低下させるための研究を進めている。HIVベクターの内部プロモーターが周囲の遺伝子を活性化する度合いを測定するアッセイ系を確立し、内部プロモーターとインスレーターの影響を検討した。内部プロモーターとしては、イントロンをもつEF1aのプロモータを逆向きに挿入したベクターが最も周囲への影響が少なかった。また、chicken globin遺伝子のコア・インスレーター(cHS4)を発現ユニットの両側に挿入することで、ベクターのタイターを下げることなく周囲への影響を遮断できることを見出した。2)癌遺伝子治療法の開発:血管新生抑制作用のあるendostatinをもつウイルスベクターHIV-EndあるいはAAV-Endを作製し癌遺伝子治療の可能性を検討した。EB陽性ヒトリンパ腫細胞の増殖が筋肉内に投与したHIV-Endにより著明に抑制され、生存曲線の改善も認められた。同様にSCIDマウスに移植された多発性骨髄腫細胞の増殖が造血幹細胞に導入したHIV-Endにより著明に抑制されることが明らかした。同所移植の系として、膵癌細胞をハムスターの膵臓に移植し肝臓転移を起こすモデルを作製し、AAV-Endが原発腫瘍の増殖、及び転移の両者に著明な抑制効果をもつことを示した。また、我々が新たに作成した慢性白血病を自然発症するbcr/ablトランスジェニックマウスをモデルとしたendostatinの遺伝子治療の有効性を確認した。

我们研究了 HIV 载体的开发以及癌症基因治疗的可能性。 1）改进HIV载体：针对逆转录病毒载体引起白血病的报道，我们正在进行研究，以减少由于HIV载体插入突变而导致细胞癌变的可能性。我们建立了一个检测系统来测量HIV载体的内部启动子激活周围基因的程度，并研究了内部启动子和绝缘子的作用。对于内部启动子，以相反方向插入带有内含子的EF1a启动子的载体对周围环境的影响最小。我们还发现，通过在表达单元的两侧插入鸡球蛋白基因（cHS4）的核心绝缘体，我们可以在不降低载体滴度的情况下阻断对周围环境的影响。 2）癌症基因治疗的发展：我们创建了含有抑制血管生成的内皮抑素的病毒载体HIV-End或AAV-End，并研究了癌症基因治疗的可能性。肌内注射HIV-End可显着抑制EB阳性人淋巴瘤细胞的增殖，并且还观察到生存曲线的改善。同样，研究表明，移植到SCID小鼠体内的多发性骨髓瘤细胞的增殖被引入造血干细胞的HIV-End显着抑制。作为原位移植系统，我们创建了一个模型，将胰腺癌细胞移植到仓鼠的胰腺中并引起肝转移，结果表明AAV-End对原发肿瘤的生长和转移具有显着的抑制作用。我们还使用我们新创建的 bcr/abl 转基因小鼠模型证实了内皮抑素基因治疗的有效性，该模型自发发展为慢性白血病。