リボソームタンパク質―RNAの相互作用機構の解析

核糖体蛋白-RNA相互作用机制分析

• 批准号: 11169228
• 负责人: 木村 誠
• 金额: $ 14.4万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11169228/
• 关键词: リボソーム; リボソームタンパク質; RNA結合タンパク質; タンパク質-RNA相互作用; 表面プラズモン共鳴法; リボソーム蛋白質; RNA; 蛋白質-RNA 相互作用; 高次構造; X線解析; リボソームRNA; リボソーム; リボソームタンパク質; RNA結合タンパク質; タンパク質-RNA相互作用; 表面プラズモン共鳴法; リボソーム蛋白質; RNA; 蛋白質-RNA 相互作用; 高次構造; X線解析; リボソームRNA

昨年度までに、リボソームタンパク質BstL5と5S rRNAとの相互作用機構を明らかにするため、5S rRNAとの結合に関与するアミノ酸を特定するとともに、その役割について解析した。その結果、βシート上のアミノ酸はL5とRNAとの複合体の安定化に貢献していること、一方、ループ上のアミノ酸はRNAの認識に関与していることが明らかになった。本年度では、BstL5のRNP2領域(Glu-^<32>-Lys-Ile-Val-Ile-Asn-Met^<38>)に無作為に変異を導入し、ファージ提示法によりRNA結合能を維持した変異タンパク質BstL5を選択することにより、RNP2のアミノ酸残基の重要性を検討した。変異体L5遺伝子は(VNN)7を含むプライマー(72mer)を用いたPCRにより作成し、ファージミドpLUCK2000を用いたファージ提示法でRNA結合能を保持した変異体を選択した。その結果、野生型と同程度の結合活性を持っ11個の変異体が選択され、その内7種は33位にLysもしくはArg、37位にAsnを持つこと、また34〜36位に疎水性アミノ酸が位置していることを見出した。以上の結果より、33位の塩基性アミノ酸と37位のAsn、その間の3残基の疎水性アミノ酸が、RNP2のRNA結合活性に重要であることが示唆された。

直到去年，为了阐明核糖体蛋白BSTL5和5S rRNA之间相互作用的机制，我们确定了与5S rRNA结合的氨基酸并分析了它们的作用。结果表明，β片上的氨基酸有助于L5和RNA之间的络合物的稳定，而环上的氨基酸参与RNA识别。在今年，我们通过将突变随机引入BSTL5（Glu-^<32> -Lys-Lys-lys-lys-ile-val-ile-asn-Met^<38>），并选择了MUTE Protin BSTL5，从而研究了RNP2的氨基酸残基的重要性。使用含有（VNN）7的底漆（72mer）的PCR制备突变的L5基因，并使用phage呈递选择保留RNA结合能力的突变体使用phage Edentation选择Phagemid Pluck2000。结果，选择了11个与野生型相似的结合活性的突变体，其中7个在37位的位置为33和ASN的LYS或ARG，位置为34-36的疏水性氨基酸。以上结果表明，位置33和ASN的碱性氨基酸在位置37处，并且它们之间的三个残基的疏水性氨基酸对于RNP2的RNA结合活性很重要。