白血病細胞の分化により発現する新規SLAPと分化制御の解析

白血病细胞分化表达的新型SLAP分析及分化控制

基本信息

批准号：
09254254
负责人：
畠清彦
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Jichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09254254/
关键词：
分化誘導 retinoic acid SLAP(Src-like adaptor protein)アポトーシス内皮型IL-8

项目摘要

白血病株細胞U937に、分化誘導療法のretinoic acid(RA)を曝露することによって出現する遺伝子を、differeutial display法でクローニングしたところSLAP(Src-like adaptor protein)であった。以下の点を明らかにした。1.SLAP遺伝子を大腸菌で発現、精製し、ポリクローナル抗体を作成した。2.SLAP遺伝子のstable transformant作成を試みたところ、核は巨大化して多核となり細胞はアポトーシスを誘導し、線維肉腫株細胞でも認められた。抗体はウエスタンで作動する系が確立できた。3.分化誘導中にアポトーシスに陥ることから、この作用機構についても解析した。白血病細胞株自身がアポトーシス誘導因子を産生していることがわかった。精製し、蛋白のN末端アミノ酸配列分析を行い、同定した。マウスに白血病細胞を移植して、この因子を注射したところアポトーシス誘導がおこり、腫瘍も縮小した。臨床例でも解析したところinvitroでは誘導された。作用する新たな分子とSLAPとの関係についても研究が必要である。SLAP遺伝子は全長を遺伝子導入すると、細胞がアポトーシスをおこす事から、遺伝子に変異を入れたものの樹立を試みる必要がある。現在進行中である。アポトーシスに陥る白血病株細胞は培養上清中にアポトーシスを誘導する因子が産生されており、精製したところ内皮型IL-8であると同定された。現在作用機序について研究中であり、臨床応用及びSLAPとの関係について研究を進めたい。

我们使用差异显示方法克隆了白血病细胞系 U937 暴露于分化诱导疗法视黄酸 (RA) 时出现的基因，并发现它是 SLAP（Src 样接头蛋白）。澄清了以下几点。 1. SLAP基因在大肠杆菌中表达、纯化并制备多克隆抗体。 2.当我们试图创建SLAP基因的稳定转化体时，细胞核变大且多核，并且细胞诱导细胞凋亡，这在纤维肉瘤细胞系中也观察到。我们能够建立一个以西方模式运行的抗体系统。 3.由于细胞凋亡发生在分化诱导过程中，因此还分析了其作用机制。研究发现白血病细胞系本身产生凋亡诱导因子。通过N端氨基酸序列分析纯化并鉴定蛋白质。当小鼠被移植白血病细胞并注射这种因子时，细胞凋亡被诱导，肿瘤缩小。当分析临床病例时，它是在体外诱导的。还需要研究 SLAP 和新的作用分子之间的关系。如果引入全长SLAP基因，细胞将会发生凋亡，因此有必要尝试创建一个带有突变的基因。目前正在进行中。经历凋亡的白血病细胞系在培养上清液中产生诱导凋亡的因子，经纯化后，其被鉴定为内皮IL-8。我们目前正在研究其作用机制，并希望继续进行临床应用以及与SLAP关系的研究。