MHC結合性ペプチドモチーフを応用した自己免疫病の解析

使用 MHC 结合肽基序分析自身免疫性疾病

基本信息

批准号：
08282229
负责人：
松下祥
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究はMHC-ペプチド親和性をより迅速、簡便、かつ正確に決定する方法の開発し、これを用いてHLA-DR9分子に結合ペプチドの構造モチーフを同定し、β2-Glycoprotein I(β2-GPI)蛋白中にT細胞エピトープを推定することを目的とした。そのためにまず、15アミノ酸残基のランダムペチドを発現するファージ(fUSE5)ライブラリーの中から、精製DR9分子に結合性の高いファージ粒子を選択し、そのインサートのアミノ酸配列を同定した。そのペプチド上の各アミノ酸残基を一箇所置換したアナログペプチドとDR9分子との結合性を定量し、DR9分子に結合するために重要なペプチド上の残基(アンカー)の位置を決定した。さらにELISA法を応用して、精度や簡便さにおいて従来のアッセイ法に勝る方法を樹立し、これを用いて各アンカーに許容されるアミノ酸残基(モチーフ)を決定した。同定されたDR9結合モチーフはTrpxxSer(xは任意のペプチド)であり、第1アンカーにはTrpの他に、Tyr,Met,Phe,Ile,Leu,Valなどの疎水性アミノ酸残基とCysが、第2アンカーには、Serの他にThr,Gly,Ala,Val,Ile,Pheなどの弱い疎水性または中性親水性のアミノ酸残基とHisが許容された。1)第1アンカーにCysが許容される点、2)第2アンカーにSerのような小型中性アミノ酸残基が許容される点、3)第3、4、5アンカーにアミノ酸残基の制約がない点において、DR9結合モチーフは他のDR結合モチーフと異なっていた。さらに、1)に対応して、Cys残基が豊富なβ2-GPI蛋白中には、41箇所ものDR9結合モチーフを有するアミノ酸配列が存在することを明らかにした。今後、DR9結合モチーフを有するβ2-GPI合成ペプチドに自己反応性を示すT細胞が患者の末梢血中に存在するか否かを検討することは重要な課題である。

这项研究旨在开发一种方法，以更快，方便，准确地确定MHC肽亲和力，使用此方法鉴定与HLA-DR9分子结合的肽的结构基序，并估算β2-糖蛋白I（β2-GPI）蛋白的T细胞表观。为此，从表达15个氨基酸残基的随机肽的噬菌体（Fuse5）文库中选择具有较高结合特性的噬菌体颗粒，并鉴定了插入物的氨基酸序列。 DR9分子与模拟肽的结合特性进行了定量，其中在一个位置替换了肽上的每个氨基酸残基，并且在肽上的残基（锚）位置（锚定）的位置，这对于与DR9分子结合至关重要。此外，还采用ELISA方法来建立一种在准确性和简单方面优于常规测定的方法，并将其用于确定每个锚的可接受的氨基酸残基（基序）。鉴定出的DR9结合基序是TRPXXSER（X是任何肽），其第一个锚将受到疏水氨基酸残基的约束，例如Tyr，Met，Phe，Phe，Phe，Ile，Leu，Val和Cys和其他疏水氨基酸残基，例如THR，THR，GLY，GLY，GLY，GLY，ALA，ALA，VAL，ILA，ILE，ILE，PHE和他的SERCENT，并在第二名中均在第二名。 DR9结合基序与其他DR结合基序有所不同，为1）在第一个锚中允许Cys，2）在第二个锚点中允许使用小的中性氨基酸残基（例如SER），而3）在第三，第四和第五锚中无氨基酸残基约束。此外，响应于1），揭示了氨基酸序列在β2-GPI蛋白中具有多达41 dr9结合基序，该基蛋白富含Cys残基。研究患者外周血中是否存在具有DR9结合基序的β2-GPI合成肽的自身反应性特性的T细胞是否表现出自身反应性特性的T细胞是一个重要的问题。