MHC結合性ペプチドモチーフを応用した自己免疫病の解析

使用 MHC 结合肽基序分析自身免疫性疾病

基本信息

批准号：
08282229
负责人：
松下祥
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究はMHC-ペプチド親和性をより迅速、簡便、かつ正確に決定する方法の開発し、これを用いてHLA-DR9分子に結合ペプチドの構造モチーフを同定し、β2-Glycoprotein I(β2-GPI)蛋白中にT細胞エピトープを推定することを目的とした。そのためにまず、15アミノ酸残基のランダムペチドを発現するファージ(fUSE5)ライブラリーの中から、精製DR9分子に結合性の高いファージ粒子を選択し、そのインサートのアミノ酸配列を同定した。そのペプチド上の各アミノ酸残基を一箇所置換したアナログペプチドとDR9分子との結合性を定量し、DR9分子に結合するために重要なペプチド上の残基(アンカー)の位置を決定した。さらにELISA法を応用して、精度や簡便さにおいて従来のアッセイ法に勝る方法を樹立し、これを用いて各アンカーに許容されるアミノ酸残基(モチーフ)を決定した。同定されたDR9結合モチーフはTrpxxSer(xは任意のペプチド)であり、第1アンカーにはTrpの他に、Tyr,Met,Phe,Ile,Leu,Valなどの疎水性アミノ酸残基とCysが、第2アンカーには、Serの他にThr,Gly,Ala,Val,Ile,Pheなどの弱い疎水性または中性親水性のアミノ酸残基とHisが許容された。1)第1アンカーにCysが許容される点、2)第2アンカーにSerのような小型中性アミノ酸残基が許容される点、3)第3、4、5アンカーにアミノ酸残基の制約がない点において、DR9結合モチーフは他のDR結合モチーフと異なっていた。さらに、1)に対応して、Cys残基が豊富なβ2-GPI蛋白中には、41箇所ものDR9結合モチーフを有するアミノ酸配列が存在することを明らかにした。今後、DR9結合モチーフを有するβ2-GPI合成ペプチドに自己反応性を示すT細胞が患者の末梢血中に存在するか否かを検討することは重要な課題である。

在这项研究中，我们开发了一种更快速、更容易、更准确地测定 MHC 肽亲和力的方法，并用它来识别与 HLA-DR9 分子结合的肽的结构基序），目的是估计 T 细胞。蛋白质中的表位。为此，我们首先从表达15个氨基酸残基的随机肽的噬菌体（fUSE5）文库中选择了与纯化的DR9分子具有高结合特性的噬菌体颗粒，并鉴定了其插入片段的氨基酸序列。对其中肽上的每个氨基酸残基在一个位置被取代的类似物肽与DR9分子的结合进行定量，并且确定肽上对于与DR9分子的结合重要的残基（锚）的位置。此外，通过应用ELISA方法，我们建立了一种在准确性和简单性方面优于传统测定方法的方法，并用它来确定每个锚点允许的氨基酸残基（基序）。鉴定出的 DR9 结合基序是 TrpxxSer（x 是任何肽），除了 Trp 之外，第一个锚点还包含疏水性氨基酸残基，例如 Tyr、Met、Phe、Ile、Leu、Val 和 Cys。弱疏水性或中性亲水性氨基酸残基如Thr、Gly、Ala、Val、Ile和Phe以及His被允许作为第二锚点。 1) 第一个锚点允许使用 Cys，2) 第二个锚点允许使用小的中性氨基酸残基，例如 Ser，3) 对第三、第四和第五锚点的氨基酸残基的限制 DR9 结合基序不同。与其他 DR 结合基序的不同之处在于它没有。此外，对应于1)，我们发现富含Cys残基的β2-GPI蛋白含有具有41个DR9结合基序的氨基酸序列。未来，检查患者外周血中是否存在对具有 DR9 结合基序的 β2-GPI 合成肽表现出自身反应性的 T 细胞将非常重要。