膜型プロテアーゼ(MT-MMP)を標的とした癌転移・浸潤の診断・制御技術開発

靶向膜型蛋白酶（MT-MMP）诊断和控制癌症转移和侵袭的技术开发

• 批准号: 08266222
• 负责人: 佐藤 博
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08266222/
• 关键词: 癌; 転移; ゼラチナーゼA; MT-MMP; マトリックスメタロプロテアーゼ

癌の浸潤・転移のキ-エンザイムであるゼラチナーゼA活性化因子として我々は膜型マトリックスメタロプロテアーゼ(MT-MMP)を同定した。その後さらに2種類のMT-MMPを同定しそれらは各々MT1-,MT2-,MT3-MMPと命名された。なかでもMT1-MMP発現は癌組織における発現頻度が特に高く組織におけるゼラチナーゼA活性化と最もよく相関することからMT1-MMPの浸潤・転移における重要性が示唆された。MT1-MMPの血清診断技術開発のための単クローン抗体を作成した。3種類のペプチドに対する抗体を数クローンづつ得て、各々の特異性を検討した。その結果、複数のクローンについて免疫沈降、ウエスタンブロッティング、組織免疫染色に使用可能なことがわかった。大腸菌にて産生したリコンビナントMT1-MMPはゼラチナーゼA活性化能を有すること、またペプチド基質を切断することからこの標品を用いた阻害剤スクリーニング系を開発した。その結果、既知の抗癌・抗転移剤として開発されたマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、BB94,CT543について良好な結果を得た。よって本システムはマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤スクリーニングシステムとしての有用性が示された。

我们发现膜型基质金属蛋白酶 (MT-MMP) 是明胶酶 A 的激活剂，而明胶酶 A 是癌症侵袭和转移的关键酶。随后，又鉴定出两种类型的MT-MMP，并分别命名为MT1-、MT2-和MT3-MMP。其中，MT1-MMP 表达在癌组织中特别频繁地表达，并且与组织中明胶酶 A 的激活相关性最好，表明 MT1-MMP 在侵袭和转移中的重要性。我们创建了用于开发 MT1-MMP 血清诊断技术的单克隆抗体。获得了针对这三种类型的肽的几个抗体克隆，并检查了每种抗体的特异性。结果发现多个克隆可用于免疫沉淀、蛋白质印迹和组织免疫染色。由于大肠杆菌产生的重组 MT1-MMP 具有激活明胶酶 A 并裂解肽底物的能力，因此我们使用该制剂开发了抑制剂筛选系统。结果，基质金属蛋白酶抑制剂BB94和CT543获得了良好的结果，它们被开发为已知的抗癌和抗转移剂。因此，证明了该系统作为基质金属蛋白酶抑制剂筛选系统的有用性。

项目成果

H.Ohtani: "Dual over-expression pattern of membrane-type metalloproteinase-1 in cancer and stromal cells by in situ hybridization and immunoelectron microscopy." Int.J.Cancer. 68. 565-570 (1996)

H.Ohtani：“通过原位杂交和免疫电子显微镜观察癌症和基质细胞中膜型金属蛋白酶-1 的双重过度表达模式。”

Y.Tsunezuka: "Expression of membrane-type matrix metalloproteinase 1 (MT1-MMP) in tumor cells enhances pulmonary metastasis in an experimental metastasis assay." Cancer Res.56. 5678-5683 (1996)

Y.Tsunezuka：“在实验性转移测定中，肿瘤细胞中膜型基质金属蛋白酶 1 (MT1-MMP) 的表达增强了肺转移。”

T.Kinoshita: "Processing of a precursor of 72-kilodalton Type IV collagenase/gelatinase A by a recombinant membrane-type 1 matrix metalloproteinase." Cancer Res.56. 2535-2538 (1996)

T.Kinoshita：“通过重组膜 1 型基质金属蛋白酶处理 72 千道尔顿 IV 型胶原酶/明胶酶 A 的前体。”

K.Imai: "Membrane-type matrix metalloproteinase 1 is a gelatinolytic enzyme and secreted in a complex with tissue inhibitor of metalloproteinase 2." Cancer Res.56. 2707-2710 (1996)

K.Imai：“膜型基质金属蛋白酶 1 是一种明胶分解酶，以与金属蛋白酶 2 组织抑制剂的复合物形式分泌。”

T.Yoshizaki: "Increased expression of membrane type 1-matrix metalloproteinase in head and neck carcinoma." Cancer. 79. 139-144 (1997)

T.Yoshizaki：“头颈癌中膜 1 型基质金属蛋白酶的表达增加。”